[发明专利]一种家禽大肠杆菌疫苗的制作方法

权利要求书

1.一种家禽大肠杆菌疫苗的制作方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）针对有需求的养殖场，从每一家养殖场的病鸡肝脏中分别提取相应的细菌，标记并备用；

（2）将每个养殖场的细菌，进行培养、灭活、离心、重悬，得到大肠杆菌菌体；

（3）根据每个养殖场的实际需要将大肠杆菌菌体制备成菌量为5×10⁹-2×10¹⁰CFU/mL的大肠杆菌疫苗。

2.根据权利要求１所述的家禽大肠杆菌疫苗的制作方法，其特征在于步骤（1）中，每个养殖场只做自家菌苗，采取针对性小产量固体培养。

3.根据权利要求１所述的家禽大肠杆菌疫苗的制作方法，其特征在于步骤（2）中所述培养的具体方法为：将每个养殖场的细菌，分别在营养平皿上划线，长出细菌后转入鉴别培养基，或直接在鉴别培养基上划线，放入37℃恒温箱中，待长出符合规定的菌落后，挑取相关的多个菌落放入营养肉汤中扩增培养，18-30个小时后，将生长良好的不同养殖场的大肠杆菌菌液分别涂布接种到营养平皿上，根据每个养殖场本批家禽数量将一定量的涂布好的大肠杆菌平皿，放入37℃恒温箱培养18-30个小时。

4.根据权利要求１所述的家禽大肠杆菌疫苗的制作方法，其特征在于步骤（2）中所述灭活的具体方法为：将生长良好的大肠杆菌平皿取出，在超净台中，用生理盐水浸泡平皿上的大肠杆菌，用涂布器轻轻刮取菌苔，冲洗并收集，得到不同养殖场的大肠杆菌菌液，根据菌液量加入3.5-4.55‰的甲醛，放入37℃摇床振荡灭活3-5天，进行灭活检测。

5.根据权利要求１所述的家禽大肠杆菌疫苗的制作方法，其特征在于步骤（2）中，离心搅拌速率为4000-8000r/min，离心时间为10min；重悬操作为：收集菌泥，用生理盐水重悬1-3次。

6.根据权利要求3所述的家禽大肠杆菌疫苗的制作方法，其特征在于所述鉴别培养基为SS琼脂培养基、伊红美蓝培养基中的一种。

7.根据权利要求3所述的家禽大肠杆菌疫苗的制作方法，其特征在于，根据需要对菌落做进一步血清学或基因学鉴定，来确认大肠杆菌。

8.根据权利要求4所述的家禽大肠杆菌疫苗的制作方法，其特征在于所述灭活检测的具体操作为：挑取灭活菌液进行营养平皿划线检测，24-48小时后，观察是否有大肠杆菌生长，灭活合格后营养平皿上应没有菌落生成。

9.根据权利要求１所述的家禽大肠杆菌疫苗的制作方法，其特征在于步骤（3）中，大肠杆菌疫苗分为大肠杆菌水苗或油乳剂灭活苗，大肠杆菌水苗通过生理盐水直接稀释大肠杆菌菌体制得；油乳灭活苗根据标准操作规程制得。