[发明专利]一种以富含油脂皮粉为底物的脂肪酶活力测定和性能评价方法

说明书

本发明提供了一种以富含油脂皮粉为底物的脂肪酶活力测定和性能评价的方法。该方法以动物皮为原料，制备富含油脂的皮粉底物；在水介质中，脂肪酶与皮粉吸附的油脂接触，催化皮粉内的油脂水解生成脂肪酸，在一定条件下反应后，同时用盐和酸终止酶反应，并使浴液中的脂肪酸盐转变成脂肪酸，使油脂和脂肪酸完全被皮粉吸附。用溶剂完全抽提皮粉中生成的脂肪酸，通过测定单位时间脂肪酸的产生量来对脂肪酶活力及性能进行表征。该方法可以在较宽pH范围测定脂肪酶的活力及对脂肪酶性能进行评价，所用底物和反应条件与动物皮处理过程中脂肪酶对皮内油脂作用的条件相近，测定结果对以动物皮为原料的制革、制裘、制胶和胶原提取等脂肪酶应用领域中的脂肪酶的选择和应用条件的优化更具有指导意义。

技术领域

本发明涉及脂肪酶活力的检测及性能评价方法，具体涉及富含油脂皮粉底物的制备方法和以富含油脂皮粉为底物的脂肪酶活力检测和性能评价方法。

背景技术

油脂是动物皮的成分之一，猪皮和绵羊皮中的油脂含量高达10%-30%，而且，随着动物饲养条件的变化，动物皮中的油脂含量有增加的趋势。

以动物皮为原料的制革、制裘、制胶和胶原提取等工业过程中，动物皮中的油脂对处理过程和产品的质量有明显的负面影响，因此，在这些产品的生产、加工过程中需要除去动物皮内的油脂。动物皮脱脂的主要方法有溶剂法、皂化法、乳化法和酶法等。由于在动物皮处理加工过程中，考虑到胶原蛋白对酸、碱和高温等的耐受性，常用的化学脱脂的条件比较温和，皂化法的脱脂效果较差，溶剂脱脂和大量表面活性剂的使用会造成安全和污染问题，因此，酶法脱脂受到更大的关注。

动物皮的酶脱脂法主要选用脂肪酶，在较温和的条件下，酶催化皮内油脂水解而达到去除效果，因此，了解脂肪酶在动物皮处理条件下对皮内油脂催化水解性能至关重要。

已报道的脂肪酶活力检测和性能评价的方法较多，使用的底物主要有三油酸甘油酯、三丁酸甘油酯和橄榄油，也有用乙酸对硝基苯酚酯和辛酸对硝基苯酚酯作为底物，其中，橄榄油是最常用的底物（如国标GB/T 23535-2009）。由于油脂与水不互溶，因此，通常用聚乙烯醇对油脂进行乳化，以改善底物的均匀性。反应结束后，通过测定脂肪酸的生成量来计算酶活力。测定反应体系中脂肪酸量的方法主要有滴定法和比色法。滴定法是直接在反应混合液中或将脂肪酸萃取出来后，通过碱滴定测定脂肪酸的量；比色法是用铜离子与脂肪酸显色，用分光光度法测定其含量。

上述的脂肪酶活力检测和性能评价方法中，选用的底物与动物皮中存在的油脂成分的种类和结构有较大的差别，检测的结果与脂肪酶对动物皮油脂的实际作用效果有一定的差异。以橄榄油或其他油脂类乳液作为底物，油脂在乳液中的分布及乳液粒子大小等受乳化方式、时间和乳化方法等因素的影响，这直接影响油脂与脂肪酶的接触程度，导致酶活力测定结果的稳定性较差。脂肪酶催化油脂水解的反应主要是油脂界面反应，乳液粒子表面包裹的表面活性剂和产物脂肪酸在油滴表面的富集会阻碍酶和油脂分子的接触，对酶的催化效率有负面影响。在乳液体系中直接进行碱滴定测定脂肪酸的量，反应体系的缓冲性会导致测定值的偏差，而且该方法不适合在碱性反应条件下脂肪酶活力的测定。用溶剂对乳液体系中的脂肪酸萃取后进行测定，由于溶剂的萃取效率的原因，存在测定结果偏低的问题。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种脂肪酶活力测定和性能评价方法。本发明的基本特点是以富含油脂的皮粉为底物，测定结果对以动物皮为原料的制革、制裘、制胶和胶原提取等脂肪酶应用领域中的脂肪酶的选择和应用条件的优化更具有实际的指导意义。

本发明的目的由以下技术措施实现，其中所述原料份数除特殊说明外，均为质量份数。

（1）富含油脂皮粉底物的制备