[发明专利]一种猪圆环病毒基因工程亚单位疫苗及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种猪圆环病毒基因工程亚单位疫苗及其制备方法与应用。通过克隆新型猪圆环病毒——PCV3的核衣壳蛋白，利用大肠杆菌或杆状病毒表达系统成功表达得到纯度较高的PCV‑Cap蛋白。利用该蛋白，本发明首次成功研制出了针对PCV3的亚单位疫苗，所制得的疫苗抗原纯度高、安全性好、免疫原性强，且对猪等动物没有致病性，抗原在中性PH的缓冲溶液中有很好的溶解性；同时，制备方法简单且成本低，适合工业化、规模化生产；为新型猪圆环病毒的防控提供了有效、有力的手段，在PCV3的防控领域具备广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉生物制药技术领域，特别涉及一种猪圆环病毒基因工程亚单位疫苗及其制备方法与应用。

背景技术

圆环病毒属于圆环病毒科圆环病毒属，其基因组为一个2kb左右的环状单链DNA。圆环病毒可以感染多种动物，包括猪、犬、鸭、鸡、狐狸和鱼类。圆环病毒主要编码两个开放性阅读框(rep和cap)。众所周知，有两个圆环病毒可以感染猪。猪圆环病毒2型(PCV2)感染可以导致不同的临床疾病，对养猪业造成严重的经济损失，而圆环病毒1型(PCV1)不引起临床疾病。2015年，美国研究人员通过宏基因组测序，在美国检测到一个新型圆环病毒(PCV3)，该圆环病毒与皮炎肾病综合征、繁殖障碍、心肌炎以及多系统炎症相关。2016年12月，华南农业大学宋长绪研究员组在我国首次检出致病性的新型猪圆环病毒—PCV3-China/GD2016病毒株，通过对PCV3毒株全基因组和其部分基因的遗传进化研究发现，PCV3与PCV1和PCV2处于不同的进化分支(图1)，属于新型的猪圆环病毒(Genomecharacterization of a porcine circovirus type 3in South China,Changxu Song,Transbound Emerg Dis.2017Mar 13.)。目前，不管是国际还是国内，都没有PCV3疫苗，但疫苗是控制该病的重要手段。而现有的PCV2疫苗对PCV3的防控无效，因此，PCV3疫苗的研发迫在眉睫。

基因工程亚单位疫苗(Subunit vaccine)又称生物合成亚单位疫苗或重组亚单位疫苗，是指将保护性抗原基因在原核或真核细胞中表达，并以基因产物-蛋白质或多肽制成疫苗。与传统减毒苗或灭活苗相比，安全性高，纯度高，稳定性好，产量高。

发明内容

本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种猪圆环病毒基因工程亚单位疫苗，利用PCV3的核衣壳蛋白研制基因工程疫苗，用于防控PCV3。

本发明的又一目的在于提供所述疫苗的制备方法。

本发明的再一目的在于提供所述疫苗的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种猪圆环病毒基因工程亚单位疫苗，包含一种可溶性融合蛋白，所述的可溶性融合蛋白具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。

所述的可溶性融合蛋白是免疫活性成分，其来自于猪圆环病毒3型核衣壳蛋白，特别是来自于猪圆环病毒PCV3-China/GD2016病毒株。

所述的猪圆环病毒基因工程亚单位疫苗还包括佐剂；优选为氢氧化铝胶佐剂和水包油佐剂中的一种或至少两种；进一步优选为SEPPIC公司的MONTANIDE^TM ISA 15A VG和ISA206VG中的一种或两种。

编码所述的可溶性融合蛋白的核苷酸序列，如SEQ ID NO.2所示。

所述的猪圆环病毒基因工程亚单位疫苗的制备方法，包括如下步骤：

将编码所述的可溶性融合蛋白的核苷酸序列克隆入表达载体构建重组表达载体；将所述重组表达载体转入表达系统中进行表达，纯化，得到所述的猪圆环病毒基因工程亚单位疫苗。