[发明专利]一种用米曲霉发酵胡萝卜制备烟用香料的方法

说明书

技术领域

本发明属于卷烟香精香料制备技术领域，具体是涉及一种利用特殊的米曲霉菌株发酵胡萝卜制备烟用香料的方法。

背景技术

在烟草行业中，香精香料对卷烟产品的口味起着决定性作用。现今生产的香料、香精中约85％的产品是通过化学合成方法得到的。但是用化学法合成的香料不仅合成较困难、且大量使用会对人体健康造成影响。随着人们生活水平的提高，对烟用香料的需求趋向于天然、健康、安全、营养和多功能性。

天然香精香料是高价值的精细化工产品，但由于原料有限、提取成本高，仅仅依靠从天然动、植物中提取天然香料，远远满足不了卷烟香料市场的需求。利用微生物发酵技术可以制备香料或进行香料的转化，在提高香料产品质量的同时，还能够节约能源、降低成本，因此，科技人员对于卷烟用香精香料的生物制取技术进行了不断尝试。

类胡萝卜素是一大类在自然界广泛分布的四萜类化合物，其降解的致香物质包括β-紫罗兰酮、β-大马酮、和二氢猕猴桃内酯等，因具有较低的感观阈值，是许多香料的特征香味，这类香味物质在天然材料中含量很低，且提取成本昂贵。近年来，科研工作者们开始尝试通过酶或微生物体系模拟类胡萝卜素的自然降解，以获得新型香料。但现有技术的效果尚不理想，难以满足工业化生产的实际需要。

胡萝卜富含类胡萝卜素，每100克脱水胡萝卜含有约17250微克的胡萝卜素，以β-类胡萝卜素为主。以提取纯化的类胡萝卜素发酵获取香味物质成本较高，未见发酵胡萝卜原材料获取香味物质的报道。

米曲霉(Aspergillusoryzae)在自然界广泛分布，是一类产复合酶的菌株，除产蛋白酶外，还可产淀粉酶、糖化酶、纤维素酶、植酸酶等，但关于用米曲霉发酵胡萝卜制备烟用香料的研究，在现有技术中尚未见报道。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种以特殊的米曲霉菌株发酵胡萝卜制备烟用香料的方法。所得产品符合天然香料的要求，具有浓郁甜果香味，能够与烟香形成良好的配伍。

本发明的目的通过下述技术方案予以实现。

除非另有说明，本发明中所采用的百分数均为质量百分数。

本发明从云南省红河州陈化烟叶中分离了一株真菌YNCA 9804作为试验菌种，对其进行了ITS序列分析，鉴定结果表明该细菌属于曲霉属，其分类命名为米曲霉(Aspergillusoryzae)YNCA 9804，保藏号为CCTCC No：M2016654。

本发明所述的米曲霉(Aspergillusoryzae)YNCA 9804菌株的形态学特征为：菌落微膨大、疏松粉状，中间淡黄绿色，边缘白色，背面乳白色；菌丝体发达，菌丝不光滑，有隔多分枝；分生孢子梗粗糙或有麻点，孢子囊呈球形或半球形，孢子链着生于小孢子梗上。

本发明所述的米曲霉(Aspergillusoryzae)YNCA 9804菌株的分子鉴定特征为：测序结果在GenBank中进行同源性比对，提取相似度98％以上的序列，利用MEGA6.0软件，以领域连接法构建系统发育树，YNCA9804与菌株Aspergillusoryzae strain ATCC 42149聚为一簇，同源性为100％，鉴定菌株YNCA9804为米曲霉(Aspergillusoryzae)。

利用所述米曲霉(Aspergillusoryzae)YNCA 9804菌株发酵胡萝卜制备烟用香料的方法，包括以下步骤：

(1)将米曲霉菌株YNCA 9804置于斜面固体培养基中保存备用；

(2)将保存备用的米曲霉菌株YNCA 9804转接到液体种子培养基中，摇床上28℃培养24h，转速为180r/min，得米曲霉种子液；所述的液体种 子培养基：NaNO₃ 2g/L，K₂HPO₄1g/L，MgSO₄.7H₂O 0.5g/L，KCL 0.5g/L，FeSO₄.7H₂O 0.01g/L，葡萄糖20g/L，pH值6.5，装入250mL锥形瓶，100mL/瓶，121℃，25min灭菌备用；