[发明专利]n‑3PUFA磷脂在改善慢性疲劳综合征制品中的应用

说明书

技术领域

本发明属于活性物质筛选技术领域，涉及n-3PUFA磷脂在改善慢性疲劳综合征制品中的应用，具体涉及海参磷脂和鱿鱼卵磷脂在预防、改善或治疗慢性疲劳综合征失调制品中的应用。

背景技术

慢性疲劳综合征(chronic fatigue syndrome，CFS)，又称为慢性疲劳免疫功能障碍综合征，是亚健康状态的一种特殊表现。以长期严重的疲劳感(至少半年以上)为突出临床表现，并伴有失眠、记忆力下降、骨豁肌疼痛及多种精神神经症状，但无其他器质性及精神性疾病为特征的一组复杂的功能紊乱证候群。国内调查显示CFS人群发病率约在0.007％～2.8%，大部分患者年龄在30～50岁。本病已经被美国疾病控制与预防中心预测为21世纪影响人类健康的主要问题之一，虽然没有近期生命危险，但是严重影响患者的身心健康，造成生活质量下降，继而影响社会生产力和劳动力，占用医疗资源，因此已引起全社会的广泛关注。

目前治疗慢性疲劳综合征的药物的治疗效果有限，且治标不治本，还可能引起副作用，人们倾向于选择服用具有预防、减缓或治疗慢性疲劳综合征的功能成分或功能食品来达到减缓运动失调的目的，因此开发安全有效的具有预防、减缓或治疗慢性疲劳综合征的功能成分成为迫切要求。

DHA和EPA是两种常见的n-3系列不饱和脂肪酸，目前市场上的EPA/DHA产品主要为乙酯型和甘油酯型，而乙酯型EPA/DHA在人体中不仅消化和吸收比较困难，且可能存在安全隐患，因此甘油酯型EPA/DHA备受消费者欢迎。近年有研究表明，存在于磷脂中的不饱和脂肪酸相对于甘油酯型不饱和脂肪酸，不仅氧化稳定性更好，而且消化吸收速度更快，再加上磷脂本身具有改善脂肪代谢、增强免疫力等活性，因此富含EPA/DHA的磷脂可能成为代替甘油酯型EPA/DHA的新型脂质保健产品。

发明内容

本发明的目的是提供一种n-3PUFA磷脂在改善慢性疲劳综合征制品中的应用。具体从海参中提取EPA磷脂，从鱿鱼卵中提取DHA磷脂，并对EPA和DHA磷脂进行各组分的具体制备，最后对各组分的EPA和DHA磷脂进行抗疲劳试验验证。

为达到上述目的，本发明采取的具体技术方案为：

n-3PUFA磷脂在改善慢性疲劳综合征制品中的应用。

进一步的，所述的n-3PUFA磷脂包括EPA磷脂和DHA磷脂。

进一步的，所述EPA磷脂为EPA磷脂酰胆碱（EPA-PC）、EPA磷脂酰乙醇胺（EPA-PE）、EPA磷脂酰丝氨酸（EPA-PS）、EPA磷脂酰肌醇（EPA-PI）的一种或多种混合。

进一步的，所述DHA磷脂为DHA磷脂酰胆碱（DHA-PC）、DHA磷脂酰乙醇胺（DHA-PE）、DHA磷脂酰丝氨酸（DHA-PS）和DHA磷脂酰肌醇（DHA-PI）中的一种或多种混合。

进一步的，所述EPA磷脂的制备方法包括以下步骤：

1）海参经真空冷冻干燥粉碎后，制成粉末；

2）取海参干粉，在氯仿和甲醇的混合溶液中抽提过夜，过滤后，用氯化钾溶液抽提，静置分层，收集氯仿层，经减压浓缩得到海参脂质粗提取物；

3）将硅胶经活化装柱后，用氯仿平衡硅胶柱 ；再将步骤 2）得到的海参脂质粗提物用氯仿溶解后，缓慢倒入硅胶柱中，依次用氯仿、氯仿-甲醇混合液、丙酮和甲醇进行洗脱，收集洗脱液，洗脱液进行薄层硅胶板层析 (TLC)，并用碘和Dittmer试剂显色确认后减压浓缩去除残留有机溶剂即得到海参磷脂；

其中，收集氯仿-甲醇的洗脱液为EPA磷脂酰乙醇胺（EPA -PE），收集甲醇的洗脱液为EPA磷脂酰胆碱（EPA-PC）；

4）将醋酸/醋酸钠溶液缓冲液放入集热式恒温加热磁力搅拌器中预热，将 L-丝氨酸溶于其中，加入上述步骤3）中的EPA -PC，最后加入PLD，在 40 ℃下搅拌反应，加入 HCl、灭活酶，反应终止，用正己烷-异丙醇提取反应产物，即得到EPA磷脂酰丝氨酸（EPA -PS）；

5）将步骤 2）中海参脂质粗提取物，加入丙酮、三甲胺和乙酸酐，冷却过滤后，用丙酮洗脱，得到EPA磷脂酰肌醇（EPA-PI）。

进一步的，所述DHA磷脂的制备方法包括以下步骤：

1）鱿鱼卵经真空冷冻干燥粉碎后，制成粉末；

2）取鱿鱼卵干粉，在氯仿和甲醇混合溶液中抽提过夜，过滤后，用氯化钾溶液抽提，静置分层，收集氯仿层，经减压浓缩得到鱿鱼卵脂质粗提取物；