[发明专利]CD22三代嵌合抗原受体实时荧光定量PCR检测方法和试剂盒

权利要求书

1. CD22三代嵌合抗原受体实时荧光定量PCR检测方法，其特征在于，所述方法包括：

第一步：提取待测样品DNA；

第二步：PCR反应：取特异性扩增引物、PCR缓冲液、脱氧三磷酸核苷混合物、DNA染料和DNA聚合酶，加入待测样品DNA配成PCR反应液；

第三步：进行PCR扩增反应，于每个循环结束时测定吸光值；

第二步中所述特异性扩增引物为：

上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.根据权利要求1所述的CD22三代嵌合抗原受体实时荧光定量PCR检测方法，其特征在于，第三步中所述的PCR扩增反应条件为：95℃变性2分钟后，93℃25秒，57℃30秒，72℃25秒，35个循环，最后72℃延伸11分钟。

3.根据权利要求1所述的CD22三代嵌合抗原受体实时荧光定量PCR检测方法，其特征在于，第三步结束后，取5μLPCR产物进行2%琼脂糖凝胶电泳,根据PCR扩增产物长度检验扩增准确率。

4.根据权利要求1所述的CD22三代嵌合抗原受体实时荧光定量PCR检测方法，其特征在于所述脱氧三磷酸核苷混合物为dATP、dTTP、dCTP、dGTP物质的量之比为1∶1∶1∶1的混合物。

5.根据权利要求1所述的CD22三代嵌合抗原受体实时荧光定量PCR检测方法，其特征在于，所述DNA染料为SYBR染料。

6.根据权利要求1所述的CD22三代嵌合抗原受体实时荧光定量PCR检测方法，其特征在于，PCR反应液终浓度组成如下：10×扩增缓冲液10μL；4种dNTP混合物各200umol/L；特异引物上下游各20-30pmol；模板DNA0.6～1.6ug；Taq DNA聚合酶2.0- 2.5u；Mg²⁺ 1.5mmol/L；溶剂为ddH₂O加水至100μL。

7.CD22三代嵌合抗原受体实时荧光定量PCR检测试剂盒，主要包括特异性扩增引物、PCR缓冲液、脱氧三磷酸核苷混合物、DNA染料和TaqDNA聚合酶，其特征在于：所述特异性扩增引物为：上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示。

8.根据权利要求7所述的 CD22三代嵌合抗原受体实时荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，包括10×扩增缓冲液10μL脱氧三磷酸核苷混合物为 dATP、dTTP、dCTP、dGTP物质的量之比为200μmol/L；特异引物上下游各20-30pmol；模板DNA 0.6～1.6μg；Taq DNA聚合酶2.0- 2.5u；Mg²⁺ 1.5mmol/L；溶剂为ddH₂O加水至100μL。

9.根据权利要求7所述的 CD22三代嵌合抗原受体实时荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，所述DNA染料为SYBR GreenI。