[发明专利]耐除草剂大豆SHZD32-1及其衍生品种的定性PCR检测方法有效
| 申请号： | 201710117626.4 | 申请日： | 2017-03-01 |
| 公开（公告）号： | CN106702006B | 公开（公告）日： | 2020-07-17 |
| 发明（设计）人： | 陈笑芸;汪小福;徐俊锋;彭城;徐晓丽;魏巍 | 申请（专利权）人： | 浙江省农业科学院 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京思元知识产权代理事务所(普通合伙) 11598 | 代理人： | 余光军;霍雪梅 |
| 地址： | 310021 浙江省杭*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 除草剂 大豆 shzd32 及其 衍生 品种 定性 pcr 检测 方法 | ||
1.用于检测耐除草剂大豆SHZD32-1及其衍生品种的特异性PCR检测引物对，其特征在于，所述引物对由SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示核苷酸序列组成。
2.权利要求1所述的特异性PCR检测引物对在检测耐除草剂大豆SHZD32-1及其衍生品种中的应用。
3.一种耐除草剂大豆SHZD32-1及其衍生品种的定性PCR检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)提取待检测大豆样品的DNA；(2)以提取的DNA为模板，以权利要求1所述的引物对为扩增上下游引物，建立PCR扩增体系并进行PCR扩增；(3)如果从待检测样品中扩增出234bp的条带，则待检测的大豆样品是耐除草剂大豆SHZD32-1或其衍生品种；如果从待检测样品中未能扩增出234bp的条带，则待检测的大豆样品不是耐除草剂大豆SHZD32-1或其衍生品种。
4.按照权利要求3所述的定性PCR检测方法，其特征在于，所述PCR扩增体系包括：反应体系总体积为25.0μL，其中，10×PCR缓冲液2.5μL，25mmol/L氯化镁溶液1.5μL，dNTPs混合溶液2.0μL，10μmol/L上游引物0.5μL，10μmol/L下游引物0.5μL，终浓度为0.025U/μL的TaqDNA聚合酶，25mg/L DNA模板2μL，余量为双蒸水。
5.按照权利要求3所述的定性PCR检测方法，其特征在于，所述PCR扩增的程序包括：95℃变性5min；95℃变性30s，54-62℃退火45s，72℃延伸45s，共进行35次循环；72℃延伸7min。
6.按照权利要求5所述的定性PCR检测方法，其特征在于，所述PCR扩增的程序包括：95℃变性5min；95℃变性30s，58℃退火45s，72℃延伸45s，共进行35次循环；72℃延伸7min。
7.一种耐除草剂大豆SHZD32-1及其衍生品种的定性PCR检测试剂盒，包括：10×PCR缓冲液，氯化镁溶液，dNTPs混合溶液，检测上下游引物对，Taq DNA聚合酶和双蒸水；其特征在于，所述检测上下游引物对为权利要求1所述特异性PCR检测引物对。
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