[发明专利]BCR多样性检测试剂盒及应用

说明书

相关申请

本申请是申请日为2015年08月14日，名称为“一种基于高通量测序构建白血病微小残留病灶BCR文库的多重PCR引物和方法”的中国专利申请201510500391.8的分案。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及基因检测试剂盒，特别地，涉及一种BCR多样性检测试剂盒及应用。

背景技术

T/B淋巴细胞的抗原特异性在很大程度上是由T/B淋巴细胞受体CDR3区域氨基酸序列决定。T/B细胞基因座上大量V、J基因片段在受体的合成中会产生各种多样重排，在V-J，V-D和D-J接合体之间的核苷酸不依赖模板插入或删除，与高频变异类似，这进一步增加了受体潜在的多样性。受体的这种潜在多样性很难随机产生相同的TCRB/IGH链CDR3序列，从而使每个CDR3序列有效地成为一个T/B细胞克隆的唯一标签。

因此对于B淋巴细胞IGH基因CDR3区域的序列组成进行检测，可以很好的反映BCR免疫组库的组成及应答状况。

目前，人的BCR基因的获得或分析方法仍有待改进。

发明内容

本发明提供了一种包含能够用于扩增人BCR的多重PCR引物的试剂盒及应用。

第一方面，本发明提供了一种检测BCR多样性的试剂盒，该试剂盒包含一组多重PCR引物，该多重PCR引物包括上游引物和下游引物，所述上游引物由与SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:13所示的核苷酸序列一一对应的一组序列组成，所述上游引物中的序列比SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:13中的相应序列多或少0～3个核苷酸；所述下游引物由与SEQ ID NO:14～SEQ ID NO:17所示的核苷酸序列一一对应的一组序列组成，所述下游引物中的序列比SEQ ID NO:14～SEQ ID NO:17中的相应序列多或少0～3个核苷酸。本文中，如无另外说明，“碱基”与“核苷酸”等同，比如，计数时，用1bp代表1个核苷酸。“多或少0～3个核苷酸”为在对应引物的3’端多或少0～3个核苷酸。发明人在设计以及试验筛选多重PCR引物组时，惊奇地发现，不限位置地、间隔或连续地延长和/或截短SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:13和/或SEQ ID NO:14～SEQ ID NO:17中的至少一条序列不超过3nt，所形成的多重PCR引物组，仍旧可以有效的获得目标序列。

该试剂盒中的PCR多重引物是发明人针对人BCR的可变区V区(variable区)和J区(joining区，连接区)序列特点多次设计、多次试验确定的，这组序列能够在同一反应体系、互不干扰地扩增目标序列。包含这组多重引物的试剂盒能够高效的获得足量的BCR基因序列，能够用于BCR多样性的检测分析。

本发明的这一方面的试剂盒，还可以具有以下附加技术特征中的至少一个：

延长或截短可以是连续核苷酸的，也可以是不连续核苷酸的，可以在末端延长或截短也可以在中间延长或截短。根据本发明的实施例，“多或少0～3个核苷酸”为在对应引物的3’端多或少0～3个核苷酸。

根据本发明的实施例，在引物序列的末端延长或截短。

根据本发明的实施例，在相应序列的中间进行延长或截短核苷酸，可以连续少0-3个核苷酸，也可以连续多0-3个核苷酸。

根据本发明实施例，所述上游引物为SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:13所示的核苷酸序列组成的上游引物组，所述下游引物为SEQ ID NO:14～SEQ ID NO:17所示的核苷酸序列组成的下游引物组。

根据本发明的实施例，上游引物和/或下游引物比SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:17中的相应序列多出1～3个碱基，多的核苷酸为与所在位置的模板核酸互补。

所称的“由与SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:13所示的核苷酸序列一一对应的一组序列”，是指该组序列也包含13条序列。根据本发明的实施例，该13条序列中的每条序列比SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:13中的相应序列多或少0～3个核苷酸。例如，该组序列中有一条序列比SEQ ID NO:1所示的序列多或少0～3个核苷酸的序列，该组序列中有另一条序列比SEQ ID NO:2所示的序列多或少0～3个核苷酸的序列…该组序列还有一条序列比SEQ ID NO:13所示的序列多或少0～3个核苷酸的序列。