[发明专利]一种多肽及其作为siRNA递送载体的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种多肽及其作为siRNA递送载体的应用。

背景技术

RNA干扰(RNAi)现象于1998年由Fire等发现，指通过沉默特定基因表达而治疗某些基因异常所致的疾病，目前已应用于基因功能、信号传导通路等基础研究领域，并具有应用于临床治疗的潜在价值。小干扰RNA(small interference RNA，siRNA)是由长的dsRNA前体被核酸酶dicer切割而得到的，能够特异性结合RNA诱导沉默复合物(RNA-induced silencing complex，RISC)，之后siRNA解旋，在与RISC复合物结合的siRNA链引导下，选择性降解互补的mRNA，从而实现特异的基因沉默发挥RNAi作用。因此，RNAi作用的效率很大程度上取决于siRNA在体内向靶组织或靶细胞的成功、准确递送。

但是，siRNA在体内应用时面临许多的阻碍，尤其是通过静脉注射全身应用siRNA时的效率十分有限，这是由于siRNA在循环中易被肾小球滤过而快速清除，易被血浆中核酸酶降解；且相对分子质量较大，带有负电荷，对于靶细胞的细胞膜穿透能力有限。因此，构建靶向、特异性的siRNA递送系统对于成功实现RNAi体内应用时的最大潜能具有必不可少的作用。

目前，核酸的载体递送系统通常可被分为病毒载体和非病毒载体两大类。病毒载体是基因转染的有力工具，主要包括腺病毒、腺相关病毒、慢病毒、单纯疱疹病毒和逆转录病毒等，但由于其具有的免疫原性、潜在致癌性等缺点，限制了其在临床研究中的进一步应用。目前研究较多的非病毒载体主要包括脂质体、纳米颗粒、细胞穿膜肽(Cell Penetrating Peptides，CPP)和无机物材料等。

细胞穿膜肽(CPPs)或称为蛋白转导结构域(protein transduction domains，PTDs)是非病毒载体中受到广泛关注的一类，主要包括：穿透素(penetratin)、转运素(transportan)、反转录活化因子、N-甲基化嘌呤DNA糖基化酶、聚精氨酸、鱼精蛋白等；它包含短的氨基酸序列，可与siRNA通过静电结合或通过化学键(常用二硫键)共价结合的方式形成纳米颗粒。CPPs的主要优势在于安全性高、无免疫原性、便于大规模及标准化生产、转运效率高等。精氨酸九聚物(oligo-9-arginine，9R)属于CPPs的一类，可以直接穿过细胞膜或通过胞吞方式被摄取进入细胞，且已被实验证实具有相对高的转运效率和低的细胞毒性。由于CPPs的作用方式并不依赖于受体，因此在实际的、具体的体内应用中，靶向的配体与CPPs相结合对于将siRNA运送至特异的靶组织或靶细胞，实际发挥转运潜能至关重要。

此外，成功的基因递送需要对siRNA在体内的转运过程进行详尽、实时的监测，而放射性核素技术因其具有的高灵敏度、无创、可直观动态观测被标记物体内过程等突出优势，已使其广泛用于各类体内研究中。目前，放射性核素示踪技术仍然是唯一可被成功应用于实验室及临床中的针对整合素表达的示踪技术。

发明内容

本发明的目的是提供一种多肽及其作为siRNA递送载体的应用。

本发明提供了一种多肽，命名为多肽c(RGD)₂-9R，包括两个环状RGD和九聚精氨酸。

多肽c(RGD)₂-9R中，其主链上包括两个环状RGD和九聚精氨酸。

所述RGD的氨基酸序列为Cys-Arg-Gly-Asp-(D)Ser-Cys或Cys-Arg-Gly-Asp-Ser-Cys。

所述环状RGD是借助所述RGD两端的Cys成环。

所述环状RGD的结构式如式(I)或式(II)所示。

所述多肽c(RGD)₂-9R中，在第一个环状RGD和第二个环状RGD之间，还包括酪氨酸(Tyr)。所述酪氨酸(Tyr)的作用为标记放射性核素¹³¹I和¹²⁵I。

所述多肽c(RGD)₂-9R的主链上，在第一个环状RGD和第二个环状RGD之间，还包括酪氨酸(Tyr)。所述酪氨酸(Tyr)的作用为标记放射性核素¹³¹I和¹²⁵I。

所述多肽c(RGD)₂-9R中，在第一个环状RGD和第二个环状RGD之间，还包括丝氨酸(Ser)。所述丝氨酸(Ser)的作用为增加多肽的水溶性。