[发明专利]一种与奶山羊乳体细胞数性状相关的分子标记及其应用

权利要求书

1.一种与奶山羊乳体细胞数性状相关的分子标记，其特征在于，其核苷酸序列如下所示：

gctttg ggaatgaggg cgaggctctc tgctttgcca acaggtgtgc

agcaacgaca acaagacctt cgactcttcc tgccacttct ttgccaccaa gtgcacactg

gagggcacca agaagggcca caagctccac ctggactaca tcgggccttg caaatgtgag

tctccttggg ccccgccaag cctcccgtct cagggaagag gcgccaaatt ggcactgctg

ctggctctgc cacctctggg ctgtgtgatc ttgggcacct ctcttcccct gtctgagctt

cagggatccc agttatagaa tgagatgatt gtttatgagc tggtatctgt actcaggacc

cctccaggga aggactgagc agtggaggga acacaggatc agggcagatt t

上述序列203-210位区域对应碱基AGAGGCGC存在插入/缺失突变，该突变导致Nar Ⅰ-RFLP多态性，插入AGAGGCGC突变对应序列如上所示为397bp,缺失突变对应序列389 bp为上述序列397bp在203-210位区域缺失AGAGGCGC。

2.一种检测与奶山羊乳体细胞数性状相关的基因片段突变的引物对，其特征在于，其DNA序列如下所示：

正向引物SPARCF6:GCTTTGGGAATGAGGGCGAG

反向引物SPARCR6:AAATCTGCCCTGATCCTGTGTT。

3.权利要求1所述的与奶山羊乳体细胞数性状相关的分子标记的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.以山羊SPARC基因序列为模板，设计引物对SPARCF6、SPARCR6，其DNA序列如SEQ IDNO.2-3所示；

S2.构建PCR反应体系，以奶山羊基因组DNA为模板利用S1所得引物进行PCR扩增；

S3.步骤S2所得PCR产物测序，测序序列与山羊SPARC基因比对，获得与奶山羊乳体细胞数性状相关的分子标记，其DNA序列如SEQ ID NO.1所示，该序列203-210位对应碱基AGAGGCGC存在插入/缺失突变，插入AGAGGCGC对应序列为397bp,缺失突变对应序列389bp为上述397bp序列在203-210位区域缺失AGAGGCGC。

4.如权利要求3所述的与奶山羊乳体细胞数性状相关的分子标记的制备方法，其特征在于，步骤S2中所述PCR反应体系为：1μL的50ng/μL的奶山羊外周血基因组DNA，12.5μL的2×PCR Mix，0.75μL10mM的正向引物SPARCF6,0.75μL10mM的反向引物SPARCR6,10μL的ddH₂O。

5.如权利要求3或4所述的与奶山羊乳体细胞数性状相关的分子标记的制备方法，其特征在于，步骤S2中所述PCR扩增条件为：95℃ 5min；94℃ 30s，60℃ 30s，72℃ 30s，30个循环；72℃延伸10min。

6.如权利要求3所述的与奶山羊乳体细胞数性状相关的分子标记的制备方法，其特征在于，步骤S2中所述奶山羊基因组DNA为随机选取奶山羊群体2个及以上个体基因组DNA，等量混合所得。

7.如权利要求3或6所述的与奶山羊乳体细胞数性状相关的分子标记的制备方法，其特征在于，步骤S2中PCR扩增产物经经NarⅠ酶切后产生389bp、208bp和189bp三条带，说明该个体SPARC两个等位基因203-210位突变区域分别为插入和缺失，判定为ID基因型；经NarⅠ酶切后产生389bp一条带，说明该个体SPARC两个等位基因203-210位突变区域均为缺失，判定为DD基因型。