[发明专利]林蛙皮中活性成分的集成提取工艺

权利要求书

1.林蛙皮中活性成分的集成提取工艺，其特征在于，它的工艺步骤为：

(a)林蛙皮干燥、粉碎、预处理；

(b)预处理后的林蛙皮粉加纯化水，调节温度和pH，加复合蛋白酶酶解、灭酶、离心，再经陶瓷膜分离得透过液和截留液；

(c)透过液经有机膜分离、碳柱精制、脱碳、浓缩、干燥工序，得林蛙皮胶原低聚肽；

(d)步骤(b)中的截留液经氯化十六烷基吡啶沉淀，氯化钠液解离，乙醇沉淀，无水乙醇脱水，真空干燥得HA精品。

2.根据权利要求1所述的林蛙皮中活性成分的集成提取工艺，其特征在于，所述的步骤(a)的实施方法为：将林蛙皮经20-60℃低温烘干后粉碎，过10～60目筛；将林蛙皮粉放入浓度为0.025～0.5％H₂O₂溶液中，搅拌均匀，用NaOH液调料液pH7.5～10.5，搅拌均匀；浸泡8～20h后过滤，留用固相林蛙皮粉，含色素、杂质的液相弃除。

3.根据权利要求1所述的林蛙皮中活性成分的集成提取工艺，其特征在于，所述的步骤(b)的实施方法为：将步骤(a)中处理所得的固相林蛙皮粉中加纯化水，调整底物浓度为2.5～15％，搅拌均匀；将料液加温至40～60℃，调料液pH7.5～10.0；加复合蛋白酶，蛋白质总量为1.0～5.0％，搅拌酶解3～7h，调整料液pH5.0～7.0；将料液加热至70～90℃，10～30min灭酶，管式离心机离心分离油脂和固形物后，清液过孔径10～50nm陶瓷膜过滤，得透过液和截留液，截留液为透明质酸HA，截留液中分多次加纯化水稀释后继续过滤至透过液中固含量＜0.1％，将截留液中透明质酸洗净，透过液为胶原低聚肽液，洗液合并入透过液中。

4.根据权利要求1所述的林蛙皮中活性成分的集成提取工艺，其特征在于，所述的步骤(c)的实施方法为：将透过液通过截留分子量2000～5000Da有机膜，透过液为纯低聚肽液，截留液为色素杂质，用适量纯化水多次稀释截留液，继续过滤，将截留中的低聚肽全部洗出，至透过液中固含量＜0.1％，洗液合并入透过液中，截留液弃；将透过液通过颗粒活性炭柱、陶瓷膜脱碳、减压蒸发浓缩、干燥得粉状林蛙皮胶原蛋白低聚肽。

5.根据权利要求1所述的林蛙皮中活性成分的集成提取工艺，其特征在于，所述的步骤(d)的实施方法为：步骤(c)的截留液中，加入截留液体积0.1～3倍、浓度为0.1～3.0％的氯化十六烷基吡啶CP液，搅匀后静置6～12h；使生成络合物沉淀，倾去上清液，收集沉淀，加浓度为0.2～1.0mol/L氯化钠液搅拌解离6～12h，至沉淀溶解，调解离液pH5.0～7.0，向解离液中加2～6倍95％乙醇沉淀，充分搅匀后，静置过夜，倾去上层澄清醇液，收集沉淀，用95％乙醇脱水1～2次，用无水乙醇脱水2～3次，真空干燥得HA成品。