[发明专利]一种高产细菌纤维素的发酵方法

说明书

本发明公开了一种高产细菌纤维素的发酵方法，将汉逊氏葡糖酸醋杆菌与酵母菌混合接种于改良BSH发酵培养基中28‑30℃静置培养6‑10天发酵生产细菌纤维素；其中，所述的酵母菌为酿酒酵母菌或产朊假丝酵母菌。通过将汉逊氏葡糖酸醋杆菌与一定量的酿酒酵母、产朊假丝酵母混合接种到改良BSH发酵培养基中培养，其细菌纤维素产量要显著高于汉逊氏葡糖酸醋杆菌的单菌发酵，最高时纤维素膜干重可提高500％以上。

技术领域

本发明属于微生物发酵技术领域，具体涉及一种高产细菌纤维素的发酵方法。

背景技术

19世纪末，英国科学家布朗在实验时首次发现细菌纤维素。细菌纤维素和植物纤维素一样，都是由葡萄糖通过β-1，4-糖苷键连接起来形成的大分子，而且相较于植物纤维素，细菌纤维素有许多独特的性质。首先，细菌纤维素的纯度很高，几乎不含有半纤维素、木质素和果胶等杂质；其次，细菌纤维素的弹性模量很高，一般是植物纤维素的的数倍乃至十数倍，高弹性模量赋予了细菌纤维素抗张强度高的特性；细菌纤维素具有极强的吸水性和透水透气性，能吸收60-700倍其干重的水分；细菌纤维素具有较高的生物相容性、适应性和良好的生物可降解性；最后，细菌纤维素在合成过程中具有可调控性，可根据要求，对细菌纤维素进行性质改造。现在，细菌纤维素已广泛应用于食品、造纸、医药等领域，取得了很大的经济效益。但是微生物发酵生产细菌纤维素存在着产量低、发酵周期长等问题，其产量也不能满足当下的需要，因此提高细菌纤维素的产量显得尤为重要。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种能够显著提高细菌纤维素产量的方法，以克服目前细菌纤维素发酵生产过程中产量较低的现状。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

一种高产细菌纤维素的发酵方法，将汉逊氏葡糖酸醋杆菌与酵母菌混合接种于改良BSH发酵培养基中28-30℃静置培养6-10天发酵生产细菌纤维素；其中，所述的酵母菌为酿酒酵母菌或产朊假丝酵母菌。

其中，所述的汉逊氏葡糖酸醋杆菌为CCTCC NO：M 2016696，分类命名为汉逊氏葡糖酸醋杆菌(Gluconacetobacter hansenii)A-2，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国.武汉.武汉大学，保藏日期2016年11月29日，其16S rRNA序列如SEQ ID No：1所示。

其中，所述的酿酒酵母为CGMCC 2.3857，购自于中国普通微生物菌种保藏管理中心。

其中，所述的产朊假丝酵母为ATCC 10231，购自于美国模式培养物集存库。

其中，汉逊氏葡糖酸醋杆菌与酵母菌混合接种总量为10％v/v。

其中，酿酒酵母与汉逊氏葡糖酸醋杆菌混合接种的菌体个数比为1：110～2560，优选1：1225。

其中，产朊假丝酵母与汉逊氏葡糖酸醋杆菌混合接种的菌体个数比为1：2～20，优选1：3。

其中，所述汉逊氏葡糖酸醋杆菌与所述酵母菌混合接种前，经过如下活化培养和扩大培养：

(1)将汉逊氏葡糖酸醋杆菌和酵母菌菌株分别划线转接到BSH和YPD固体培养基上，在30℃下活化两次；

(2)挑取两个活化好的汉逊氏葡糖酸醋杆菌和酵母菌菌株单菌落置于BSH和YPD液体培养基中，在30℃、150r/min的条件下培养24h用于制备种子液，将制备好的汉逊氏葡糖酸醋杆菌种子液以10％v/v的接种量扩大培养2次，将制备好的酵母菌种子液以10％v/v的接种量扩大培养1次。

本发明所述的BSH培养基配方为：葡萄糖，20g/L；鱼粉蛋白胨，5g/L；酵母浸粉，5g/L；磷酸氢二钠，2.7g/L；柠檬酸，1.15g/L，pH 5.0。