[发明专利]一种粘质沙雷氏菌磷脂酶A1基因扩增、测序方法及其引物在审
| 申请号： | 201710001548.1 | 申请日： | 2017-01-03 |
| 公开（公告）号： | CN106801090A | 公开（公告）日： | 2017-06-06 |
| 发明（设计）人： | 阚显照;王莹;易双龙;章勤;蒋澜;王青青;吴璇;丁恒武;陈仁瑞;宛凤英;王会梅 | 申请（专利权）人： | 安徽师范大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京风雅颂专利代理有限公司11403 | 代理人： | 杨红梅 |
| 地址： | 241000 安徽*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 粘质沙雷氏菌 磷脂酶 a1 基因 扩增 方法 及其 引物 | ||
1.一种用于扩增粘质沙雷氏菌磷脂酶A1基因的引物，其特征在于,所述引物包括第一引物对和第二引物对，所述第一引物对包括序列号为SEQ ID NO.1的KLSERF3和序列号为SEQ ID NO.2的KLSERR3；所述第二引物对包括序列号为SEQ ID NO.3的KLPERF4和序列号为SEQ ID NO.4的KLSERR4。
2.采用权利要求1所述引物在粘质沙雷氏菌磷脂酶A1基因测序中的应用。
3.根据权利要求1或2所述粘质沙雷氏菌磷脂酶A1基因的测序方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)提取待测样品的全基因组DNA；
(2)采用所述引物对全基因组DNA进行PCR扩增；
(3)对步骤(2)扩增后的产物片段进行琼脂糖凝胶电泳检测，割取目的条带，并经过纯化后进行测序，得到两个基因片段；
(4)对测序结果进行拼接，得到两个基因的全序列。
4.根据权利要求3所述粘质沙雷氏菌磷脂酶A1基因的测序方法，其特征在于，所述测序方法还包括采用不同菌株的粘质沙雷氏菌扩增测序并验证引物的专用性。
5.根据权利要求3所述粘质沙雷氏菌磷脂酶A1基因的测序方法，其特征在于，步骤(3)中PCR扩增后产物的两种条带所含有的DNA片段的长度分别为963bp和756bp。
6.根据权利要求3所述粘质沙雷氏菌磷脂酶A1基因的测序方法，其特征在于，步骤(2)中PCR扩增是以25μl的PCR扩增体系为基准，每条引物的浓度分别为2.2μl,模板的用量为2μl。
7.根据权利要求3所述粘质沙雷氏菌磷脂酶A1基因的测序方法，其特征在于，步骤(2)所述PCR扩增的过程中退火温度为50～60℃。
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