[发明专利]用具有工程化稳定的内源性FOXP3基因表达的CD4T细胞治疗自身免疫疾病的方法

说明书

本文公开了制造表达FOXP3的基因细胞的方法和治疗方法。在一些实施方式中，所述方法可以：提供第一核苷酸序列，其中，所述第一核苷酸序列包含编码链，所述编码链包含一个或多个调控元件以及FOXP3基因或其部分；提供核酸酶；以及在所述第一核苷酸序列上进行基因编辑过程，所述基因编辑过程编辑所述一个或多个调控元件，并任选地编辑所述FOXP3基因或其部分。本文还提供了对患有自身免疫疾病的受试者和遭受器官移植影响的受试者进行治疗的方法。

技术领域

本文描述了用于自身免疫疾病疗法和用于诱导对移植器官的耐受性的方法。该方法还可用于严重自身免疫疾病和器官移植的细胞疗法。

背景技术

外周中的免疫自身耐受性可通过可由多种细胞对免疫应答所施加的负调节来实现，其中最具特点的群是调节性T细胞(T_regs)。T_regs通过抑制效应T细胞(T_effs)活化以及发挥抗炎活性来介导自身耐受性和对同种异体抗原(alloantigens)的耐受性。例如，在自身免疫疾病和器官移植的背景下，CD4+CD25+Foxp3+T_regs是研究最充分和最具特点的T细胞之一。

T_regs也被称为“抑制性T细胞”。还特别描述了CD4+、CD25+调节性T细胞在体外和体内可表现出调节功能，并且它们在体外抑制CD4+和CD8+T_effs的增殖。还显示这些细胞在自身免疫、过敏、炎症、母体对胎儿的耐受性的维持、感染和癌症中起重要作用。已知T_regs会降低免疫应答。在癌症中，过度的T_regs细胞活性可阻止免疫系统破坏癌细胞。在自身免疫疾病中，调节性T细胞活性的缺乏可允许其它自身免疫细胞攻击机体自身的组织。

T_regs细胞还可包括在胸腺中产生的自然(n)T_regs和在外周中产生的诱导型(iT_regs)。nT_regs出现在胸腺中，并且可表达叉头/翼状螺旋转录因子FOXP3，其转而控制nT_regs分化。在IL-4、IL-10、TGF-β和IL-2存在下，在经自身抗原或同种异体抗原刺激后，iT_regs在外周中由记忆CD4+T_effs和初始CD4+T_effs产生。

FOXP3是参与免疫系统应答的蛋白质，并且由含有11个编码外显子的FOXP3基因编码，其中第一编码外显子在经修订的命名法中被指定为外显子2。FOXP3已被表征为调节性T细胞的发育和功能中的调节通路的主要调节因子。在动物研究中，已经表明表达FOXP3的T_regs在免疫耐受性(例如自身耐受性)的转移中是至关重要的。此外，已经表明FOXP3阳性细胞的诱导或给予导致糖尿病、多发性硬化、哮喘、炎性肠病、甲状腺炎和肾病模型中自身免疫疾病严重性的降低。

先前已提出了在器官移植的情况下使用T_regs抑制免疫系统或使用T_regs治疗疾病。然而，使用tT_regs或pT_regs治疗自身免疫疾病的最重要障碍之一是FOXP3表达受到表观遗传调节。在tT_regs中，FOXP3基因中的上游区域(被称为“胸腺特异性去甲基化区域”)被完全去甲基化，认为该状态导致稳定的FOXP3表达。通常，在pT_regs中未观察到完全的去甲基化。在炎症条件下，FOXP3可在pT_regs中(并且可能在tT_regs中)表观遗传沉默(尽管一些研究者认为tT_regs是完全稳定的)，这可潜在地导致pT_regs向促炎性CD4+T细胞转化。pT_regs稳定性的缺乏是重要的问题，因为回复炎性表型的pT_regs的输注的使用可导致自身免疫症状的恶化。因此，需要用于在T_regs中诱导FOXP3的安全方法。

发明内容