[发明专利]用于检测微生物的具有两个层的培养基

说明书

本发明提供一种方法以及用于其的酶底物培养基，在所述方法中即使可分解由微生物的酶分解的酶底物的酶固有地存在于分析物中，仍可抑制培养基自身的染色，且可高精确性地检测到呈染色菌落状的目标微生物。用于检测微生物的培养基包含：第一层，其中含有胶凝剂和酶底物；以及第二层，其中含有胶凝剂而不含酶底物，所述第二层邻接地层压到第一层，其中酶底物是能够释放染料化合物的化合物。

技术领域

本发明涉及一种用于检测呈彩色或荧光菌落状的微生物的培养基。

背景技术

在检测特定微生物时，通常使用适合于目标微生物的选择性介质，例如含有选择性试剂(例如抗生素和界面活性剂)的培养基、调节到特定pH值的培养基以及调节到特定葡萄糖浓度的培养基。

另外，还利用一种方法(酶底物方法)，其中将待由目标微生物所特定拥有的酶分解的底物化合物并入到培养基中，且培养基上生长的目标微生物经检测呈菌落状，所述菌落在接受利用酶分解中由从底物中释放的染料化合物染色。用于这种方法中的培养基称为“酶底物培养基”，且在结合了彩色或荧光染料化合物的各种底物化合物上已取得了进展，且已提出了有关于用于食物和饮品或临床领域中的广泛范围的菌株的酶底物培养基的提议(专利文献第1号等等)。

并入到酶底物培养基中的酶底物由目标微生物中所拥有的酶分解。然而，在若干情况下，可分解酶底物培养基中的酶底物的酶甚至包含于发酵食物(例如奶酪)的分析物和含有大量组织(例如生肉)的分析物中。无论是否存在目标微生物，当提供此类分析物作为测试样品时，酶底物被分析物中固有存在的酶分解，且培养基由染料化合物整体地染色。因此，出现难以辨别目标微生物的菌落的问题。

举例来说，已知大肠杆菌(Coliform bacilli)特定拥有β半乳糖苷酶(β-galactosidase)，且当通过酶底物方法来检测大肠杆菌时，这种培养基用作含有酶底物的培养基，所述酶底物可通过由β半乳糖苷酶分解来释放染料化合物，例如5-溴-4-氯-3-吲哚酚-β-D-哌喃半乳糖苷(5-bromo-4-chloro-3-indoxlyl-β-D-galactopyranoside；X-GAL)。然而，当尝试通过使用酶底物培养基从发酵食物分析物(例如奶酪)中检测大肠杆菌时，存在固有地存在于分析物中且衍生于乳杆菌(Lactobacilli)的大量β-半乳糖苷酶，且因此其中提供分析物作为样品的培养基中的酶底物分解，且培养基由染料化合物整体地染色。因此，辨别大肠杆菌的染色菌落变得困难。

近年来，在各种薄片形简单培养基等等上已取得进展以便实现快速培养测试，其中培养基在存储期间处于干态，但在将分析物应用作为样品时胶凝剂通过分析物中含有的水分溶胀(专利文献第2号到专利文献第5号等等)。在使用简单培养基的情况下，固有存在于分析物中的酶易于穿透到培养基中。因此，相较于在使用普通琼脂介质(ordinal agarmedium)时的情况，酶底物方法中的问题变得更显著。

引用列表

专利文献

专利文献第1号：JP 2002-537852 A。

专利文献第2号：WO 97/24432 A。

专利文献第3号：JP H10-501129 A。

专利文献第4号：JP H9-19282 A。

专利文献第5号：JP 2015-204845 A。

发明内容

技术问题

鉴于这种情形，本发明涵盖提供一种方法及用于其的酶底物培养基，在所述方法中即使可分解由微生物的酶分解的酶底物的酶固有地存在于分析物中，仍可抑制培养基自身的染色，且因此，可高精确性地检测到呈染色菌落状的目标微生物。

问题的解决方案