[发明专利]制备治疗性蛋白质的方法有效
| 申请号： | 201680037233.6 | 申请日： | 2016-04-27 |
| 公开（公告）号： | CN108138214B | 公开（公告）日： | 2021-09-21 |
| 发明（设计）人： | R·体佳妮;达里尔·培根·桑佩;约翰·罗伯雷;魏甘;何朝梅 | 申请（专利权）人： | 动量制药公司;拜奥法克图拉公司 |
| 主分类号： | C12P21/06 | 分类号： | C12P21/06;C12N15/00;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 北京安信方达知识产权代理有限公司 11262 | 代理人： | 郑霞 |
| 地址： | 美国马*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 制备 治疗 蛋白质 方法 | ||
1.一种制备治疗性蛋白质的方法，包括用以下核酸转染胆固醇营养缺陷型且谷氨酰胺营养缺陷型的哺乳动物细胞：(i)编码3-酮基类固醇还原酶的核酸；(ii)编码谷氨酰胺合成酶的核酸；(iii)含有氨基糖苷类抗生素抗性基因的核酸；以及(iv)编码所述治疗性蛋白质的核酸。
2.如权利要求1所述的方法，包括以第一、第二和第三载体转染所述胆固醇营养缺陷型且谷氨酰胺营养缺陷型的哺乳动物细胞，其中所述第一载体包含编码3-酮基类固醇还原酶的核酸；所述第二载体包含编码谷氨酰胺合成酶的核酸；且所述第三载体包含含有氨基糖苷类抗生素抗性基因的核酸。
3.如权利要求1或2的方法，进一步包括在用编码3-酮基类固醇还原酶的核酸转染期间或之后在不存在外源引入的胆固醇的情况下培养所述细胞。
4.如权利要求1或2的方法，进一步包括在用编码谷氨酰胺合成酶的核酸转染期间或之后在不存在外源引入的谷氨酰胺的情况下培养所述细胞。
5.如权利要求3的方法，进一步包括在用编码谷氨酰胺合成酶的核酸转染期间或之后在不存在外源引入的谷氨酰胺的情况下培养所述细胞。
6.如权利要求1-2、5任一项的方法，进一步包括在用编码谷氨酰胺合成酶的核酸转染之后通过逐渐减少谷氨酰胺浓度培养所述细胞。
7.如权利要求3的方法，进一步包括在用编码谷氨酰胺合成酶的核酸转染之后通过逐渐减少谷氨酰胺浓度培养所述细胞。
8.如权利要求4的方法，进一步包括在用编码谷氨酰胺合成酶的核酸转染之后通过逐渐减少谷氨酰胺浓度培养所述细胞。
9.如权利要求1的方法，进一步包括在用编码3-酮基类固醇还原酶的核酸转染期间或之后在3-酮基类固醇还原酶抑制剂存在的情况下培养所述细胞。
10.如权利要求1的方法，进一步包括在用编码谷氨酰胺合成酶的核酸转染期间或之后在谷氨酰胺合成酶抑制剂存在的情况下培养所述细胞。
11.如权利要求1-2、5、7-10任一项的方法，进一步包括在氨基糖苷类抗生素存在的情况下培养所述细胞。
12.如权利要求3的方法，进一步包括在氨基糖苷类抗生素存在的情况下培养所述细胞。
13.如权利要求4的方法，进一步包括在氨基糖苷类抗生素存在的情况下培养所述细胞。
14.如权利要求6的方法，进一步包括在氨基糖苷类抗生素存在的情况下培养所述细胞。
15.如权利要求11的方法，包括在所述氨基糖苷类抗生素以100μg/ml或200μg/ml的浓度存在的情况下培养所述细胞。
16.如权利要求12-14任一项的方法，包括在所述氨基糖苷类抗生素以100μg/ml或200μg/ml的浓度存在的情况下培养所述细胞。
17.如权利要求1的方法，其中所述氨基糖苷类抗性基因包括新霉素抗性基因且所述方法包括用包含所述新霉素抗性基因的核酸转染所述细胞。
18.如权利要求1的方法，其中所述方法进一步包括从所述细胞回收所述治疗性蛋白和在所述回收后测量所述细胞的活力。
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