[发明专利]一种抗凝血肽的制备方法及其制备得到的小肽和应用

说明书

本发明公开了一种抗凝血肽的制备方法，将牛奶离心，去除脂肪层，调节pH至5.0~8.0进行酶解反应；所述酶解反应的温度为40~60℃，酶解时间为2~4h；酶解的料水比为1:（1.5~3）；所述酶解反应所需酶的种类为木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶中的一种或多种。本发明提供的制备方法工艺简单，原料易得，制备得到的小肽类物质具有较好的抗凝血活性，可以用来弥补肝素类药物的缺陷，本发明以水牛奶作为制备来源，毒副作用小，同时开拓了新鲜牛奶资源加工的新途径，提高牛奶的高附加值，对医学、食品领域的研究具有重要意义。

技术领域

本发明属于医药、保健品技术领域，更具体地，涉及一种抗凝血肽的制备方法，及其制备得到的小肽和应用。

背景技术

血栓是指血液成分在流动过程中，在血管或心脏内膜表面形成一种半凝块状物质，由不溶性纤维蛋白、沉积的血小板、积聚的白细胞和陷入的红细胞组成。血栓栓塞性疾病是一种常见的心脑血管病，由血栓引起的血管腔狭窄与闭塞，使主要脏器发生缺血和梗死而引发机能障碍，常表现为心肌梗死、缺血性脑梗死和静脉血栓栓塞。

血栓栓塞性疾病被称为心脑血管隐形杀手，它可累及全身各个器官及系统，每年大约有3‰人发生不同形式的血栓性疾病，我国每年死于心脑血管疾病的人数达到300万人以上，它导致的死亡人数占全球每年总死亡人数的51%。存活的患者中75％致残，其中40％以上重残，严重威胁人类健康。

目前国内外该类型心血管疾病还没有理想的治疗药物，当前国内外临床上防治血栓性心脑血管疾病的药物只要有肝素和水蛭素。前者疗效低，副作用大；后者虽然疗效高，副作用小，但药价高且只能注射给药，较麻烦，经济压力大。因此急需一种高效，副作用小的，成本低的血栓性心脑血管疾病药物适应上述需求。

目前研究者对各种生物活性多肽的生物活性功能进行研究。这些生物活性多肽有：抗凝血肽，酪蛋白糖胎，阿片活性肽，免疫调节肽，抗氧化肽，抑制肽等。

其中，研究最为深入的是乳源性生物活性肽，已经有几十种具有重要的生理功能的生物活性肽从乳蛋白中被发现。牛奶蛋白中酪蛋白占80%，研究发现，酪蛋白分子中含有若干具有抗凝血酶活性的肽段---抗凝血肽。采用合适的蛋白酶酶解之后，可制备具有抗凝血活性的小肽类物质，制备工艺条件简单，可以节约了分离纯化酪蛋白的大量成本和劳动力。本发明旨在为开发以牛奶作原料的防治血栓性疾病的口服小肽类药物或功能性食品提供理论及实验依据。

发明内容

本发明的目的在于根据现有技术中的不足，提供了一种抗凝血肽的制备方法。

本发明的另一目的在于提供上述制备方法制备得到的小肽。

本发明的再一目的在于提供上述小肽在制备血栓性心脑血管疾病药物中的应用。

本发明的目的通过以下技术方案实现：

一种抗凝血肽的制备方法，将牛奶离心，去除脂肪层，调节pH至5.0~8.0进行酶解反应；所述酶解反应的温度为40~60℃，酶解时间为2~4h；酶解的料水比为1:（1.5~3）；所述酶解反应所需酶的种类为木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶中的一种或多种。

优选地，所述木瓜蛋白酶的酶用量为5000~10000u/mL，所述中性蛋白酶的酶用量为5000~10000u/mL，所述碱性蛋白酶的酶用量为5000~10000u/mL。

优选地，所述木瓜蛋白酶的酶用量为6000u/mL，所述中性蛋白酶的酶用量为6000u/mL，所述碱性蛋白酶的酶用量为6000u/mL。

优选地，酶解反应所需酶的种类为木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶。当使用上述三种酶的复合进行酶解反应时，其得到的小肽活性最高。

优选地，首先加入中性蛋白酶酶解，然后加入木瓜蛋白酶酶解，最后加入碱性蛋白酶酶解。