[发明专利]一种可提高加A效率的突变型Taq酶及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种可提高加A效率的突变型Taq酶，其特征在于，所述突变型Taq酶的氨基酸序列如SEQ NO.1所示。

2.编码权利要求1所述突变型Taq酶的基因。

3.根据权利要求2所述的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如SEQ NO.2所示。

4.含有权利要求3所述的基因的载体。

5.一种重组细胞，其特征在于，包含：

权利要求3所述的基因或

权利要求4所述的载体。

6.一种含有权利要求1所述的突变型Taq酶的聚合酶试剂。

7.如权利要求1所述的突变型Taq酶在高通量测序中的应用。

8.如权利要求1所述的突变型Taq酶的制备方法，其包括如下步骤：

1)构建含编码权利要求1所述突变型Taq酶的核苷酸序列的载体：利用含有突变位点信息的引物，对含有野生型Taq酶基因的质粒进行PCR扩增，得到目的条带后利用同源重组得到重组质粒或者直接转化得到突变质粒，测序验证；

2)将步骤1)得到的载体转化宿主细胞得到重组细胞：将载体转化到宿主细胞中，利用抗生素筛选得到正确转化的重组细胞；

3)培养并收集重组细胞，提取纯化突变型Taq酶。

9.根据权利要求8所述的突变型Taq酶的制备方法，其特征在于，步骤1）中，所述引物的具体序列如下：

E315K-1：TTCCCGCAAGAAGCCCATGTGGGCCGATCTTCTG；

E315K-2: CCCACATGGGCTTCTTGCGGGAAAGCACAAAGCC；

E388V-1: CACCACCCCCGTGGGGGTGGCCCGGCGCTACGGC；

E388V-2: GGGCCACCCCCACGGGGGTGGTGTTGGAAGGGTC；

E507K-1: CGGCAAGACGAAGAAGACCGGCAAGCGCTCCACC；

E507K-2: TGCCGGTCTTCTTCGTCTTGCCGATGGCGGGAAG；

D578G-1: AAGTAGCTCCGGCCCCAACCTCCAGAACATCCCC；

D578G-2: GGAGGTTGGGGCCGGAGCTACTTAGCCTGCCCGT；

A608V-1: GCTATTGGTGGTGCTGGACTATAGCCAGATAGAG；

A608V-2: TATAGTCCAGCACCACCAATAGCCACCCCTCCTC；

M747R-1: GGCCGAGCGCCGCGCCTTCAACATGCCCGTCCAGG；

M747R-2: TGTTGAAGGCGCGGCGCTCGGCCGCCTCCCGCAC。