[发明专利]一种检测金黄色葡萄球菌的脱氧核酶探针及其应用

说明书

本发明公开了一种检测金黄色葡萄球菌的脱氧核酶探针及其应用。本发明提供的用于检测金黄色葡萄球菌的脱氧核酶探针的结构如下：ACTCTTCCTAGCFRQGGTTCGATCAAGACACGGATCCTGACAAGGGCCAAGTTAGAATTCTAGCGTAGGGAGAGTCTCCGCCTGCAGCTCCGTCCG，其中，F是由荧光基团修饰的T碱基；Q是由淬灭基团修饰的T碱基；R代表单个插入的RNA碱基A。通过实验证明：本发明的探针可快速、准确、高灵敏的检测金黄色葡萄球菌。

技术领域

本发明涉及一种检测金黄色葡萄球菌的脱氧核酶探针及其应用，属于生物技术领域。

背景技术

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus，SA)是引起食品污染和细菌性食物中毒的一种主要细菌(由金黄色葡萄球菌引起的感染占第2位，仅次于大肠杆菌)，同时也是医院内外感染最常见的病原菌之一，会引起肺炎和脑膜炎，其所致感染病死亡率高、耐药性严重，给治疗带来极大困难。由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒也极为普遍，每年都有病例报告，造成极大的经济损失。

目前，世界各国均将金黄色葡萄球菌列为食品卫生的法定检测项目。早期诊断和治疗是提高金黄色葡萄球菌感染者治愈率的关键，建立新颖的高通量SA检测技术，开发快速、灵敏、准确的试剂盒是亟待解决的重大课题之一。

脱氧核酶为DNA片段，非蛋白质，仅能由人工合成，非生物体组成成分，分子量小，易于合成，稳定性高，不仅与RNA底物配对的精确性高，RNA分解酶活性强，而且不需要胞内酶类的参与。此外脱氧核酶具有与一般药物相似的动力学特点，对靶RNA水平的抑制程度及时间容易控制，这就决定了脱氧核酶在医药和生物学上的不可取代性和开发的必要性。近年来，可选择性催化剪切DNA中嵌入的RNA碱基的荧光标记DNA酶(RNA-cleavingFluorescent DNAaymes，RFD)模型，可快速、准确、高灵敏的检测与其特异性结合的配体。

发明内容

本发明的第一个目的是提供一种用于检测金黄色葡萄球菌的脱氧核酶探针。

本发明提供的用于检测金黄色葡萄球菌的脱氧核酶探针的结构如下：ACTCTTCCTAGCFRQGGTTCGATCAAGACACGGATCCTGACAAGGGCCAAGTTAGAATTCTAGCGTAGGGAGAGTCTCCGCCTGCAGCTCCGTCCG，其中，F是由荧光基团修饰的T碱基；Q是由淬灭基团修饰的T碱基；R代表单个插入的RNA碱基A。

上述探针中，

所述荧光基团为Fluorescein、Pyrene、Acridine、DEA(Diethylaminocoumarin)、Bodipy 493/503、ATTO 488、Alexa fluor 488、Alexa fluor 532、Alexa fluor 546、Alexafluor 647、Alexa fluor 750、AMCA(7-Amino-4-methylcoumarin)、Biotin、AminolinkerC12、Aminolinker C7、CY-3、CY-5、CY5.5、CY-7、digoxigenin、FAM、6-FAM、FITC、HEX、JOE、Phosphate、Rhodamine Green、Rhodamine Red、Rhodamine B、ROX(X-rhodamine)、TAMRA(Tetramethylrhodamine)、NBD、TET、Texas Red、Texas Red-X、Thiol、Thiol-C6S-S、Thiol-C3、Thiol-C3S-S、Biotin TEG、NAP(Naphthofluorescein)、DyLight 680、DyLight 752或DyLight 770；所述荧光基团具体为Fluorescein；

所述淬灭基团为DABCYL、TAMRA、Eclipse、BHQ1、BHQ2或BHQ3；所述淬灭基团具体为DABCYL。