[发明专利]一种检测金黄色葡萄球菌的脱氧核酶探针及其应用在审
申请号: | 201611152007.0 | 申请日: | 2016-12-14 |
公开(公告)号: | CN108220458A | 公开(公告)日: | 2018-06-29 |
发明(设计)人: | 蒋宇扬;谭英;曲龙;何盛南;谭春燕;刘峰 | 申请(专利权)人: | 清华大学深圳研究生院 |
主分类号: | C12Q1/689 | 分类号: | C12Q1/689;C12Q1/14;C12N15/11;C12R1/445 |
代理公司: | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人: | 关畅;白艳 |
地址: | 518055 广东省深*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 金黄色葡萄球菌 探针 脱氧核酶 种检测 修饰 淬灭基团 荧光基团 检测 灵敏 应用 | ||
1.一种用于检测金黄色葡萄球菌的脱氧核酶探针,其结构如下:ACTCTTCCTAGCFRQGGTTCGATCAAGACACGGATCCTGACAAGGGCCAAGTTAGAATTCTAGCGTAGGGAGAGTCTCCGCCTGCAGCTCCGTCCG,其中,F是由荧光基团修饰的T碱基;Q是由淬灭基团修饰的T碱基;R代表单个插入的RNA碱基A。
2.根据权利要求1所述的探针,其特征在于;
所述荧光基团为Fluorescein,Pyrene,Acridine,Diethylaminocoumarin,Bodipy493/503,ATTO 488,Alexa fluor 488,Alexa fluor 532,Alexa fluor 546,Alexa fluor647,Alexa fluor 750,7-Amino-4-methylcoumarin,Biotin,Aminolinker C12,Aminolinker C7,CY-3,CY-5,CY5.5,CY-7,digoxigenin,FAM,6-FAM,FITC,HEX,JOE,Phosphate,Rhodamine Green,Rhodamine Red,Rhodamine B,X-rhodamine,Tetramethylrhodamine,NBD,TET,Texas Red,Texas Red-X,Thiol,Thiol-C6 S-S,Thiol-C3,Thiol-C3 S-S,Biotin TEG,Naphthofluorescein,DyLight 680,DyLight 752或DyLight 770;所述荧光基团具体为Fluorescein;
和/或,所述淬灭基团为DABCYL,TAMRA,Eclipse,BHQ1,BHQ2或BHQ3;所述淬灭基团具体为DABCYL。
3.一种用于检测金黄色葡萄球菌的脱氧核酶探针溶液,是将权利要求1所述的探针与缓冲液混匀得到的溶液。
4.根据权利要求3所述的脱氧核酶探针溶液,其特征在于:所述探针在所述脱氧核酶探针溶液中的浓度为0.01-5uM。
5.一种用于检测金黄色葡萄球菌的试剂盒,包括权利要求1或2所述的脱氧核酶探针或权利要求3或4所述的脱氧核酶探针溶液。
6.权利要求1或2所述的脱氧核酶探针或权利要求3或4所述的脱氧核酶探针溶液或权利要求5所述的试剂盒在检测或辅助检测待测样品中是否含有金黄色葡萄球菌中的应用。
7.权利要求1或2所述的脱氧核酶探针或权利要求3或4所述的脱氧核酶探针溶液或权利要求5所述的试剂盒在制备检测或辅助检测待测样品中是否含有金黄色葡萄球菌的产品中的应用。
8.一种检测待测样品中是否含有金黄色葡萄球菌的方法,包括如下步骤:将待测样品与权利要求3或4所述的脱氧核酶探针溶液混合,反应,得到反应产物;将所述反应产物中的寡核苷酸沉淀,得到寡核苷酸沉淀,检测所述寡核苷酸沉淀,根据所述寡核苷酸沉淀判断待测样品中是否含有金黄色葡萄球菌;
若所述寡核苷酸沉淀中含有大小为96bp和81bp的条带,则所述待测样品中含有或候选含有金黄色葡萄球菌;
若所述寡核苷酸沉淀中不含有大小为96bp和81bp的条带,则所述待测样品中不含有或候选不含有金黄色葡萄球菌。
9.一种检测待测样品中是否含有金黄色葡萄球菌的方法,包括如下步骤:分别将待测样品和阴性对照与权利要求3或4所述的脱氧核酶探针溶液混合,反应,分别得到反应产物;根据所述反应产物的荧光强度判断待测样品中是否含有金黄色葡萄球菌,
若所述反应产物的荧光强度高于阴性对照的荧光强度,则所述待测样品中含有或候选含有金黄色葡萄球菌;
若所述反应产物的荧光强度等于或小于阴性对照的荧光强度,则所述待测样品中不含有或候选不含有金黄色葡萄球菌。
10.根据权利要求9所述的方法,其特征在于:检测所述反应产物的荧光强度的方法为在酶标仪上检测所述反应产物的荧光强度。
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