[发明专利]沙门氏菌核酸快速检测试剂盒、试纸及检测方法

权利要求书

1.一种沙门氏菌核酸快速检测试剂盒，其特征在于：包括正向引物invA-F:序列5’-ATTTCTATGTTCGTCATTCCATTACCTACC-3’, 反向引物invA-R:序列：5’-ATGTAGAACGACCCCATAAACACCAA-3’，用地高辛和生物素分别标记正向引物、反向引物的5’端，金标抗体，抗金标抗体种属的抗体，和显色物生物素的配体物质；

还包括解旋酶恒温扩增体系，所述扩增体系包括10×Annealing Buffer、dNTP、MgSO₄、NaCl、Enzyme Mix；

所述显色物生物素的配体物质为链霉亲合素；

所述金标抗体为鼠抗地高辛抗体，抗金标抗体种属的抗体为羊抗鼠二抗；

所述试剂盒还包括沙门氏菌核酸快速检测试纸，包括样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，样品垫一端与金标垫一端端部重叠，金标垫另一端与硝酸纤维素膜端部重叠，硝酸纤维素膜另一端部与吸水纸重叠，在硝酸纤维素膜间隔平行嵌装有检测线和质控线，检测线在金标垫一侧，质控线在检测线与吸水纸端部之间；

所述金标垫上喷涂金标抗体，检测线上包被显色物生物素的配体物质，质控线上包被抗金标抗体种属的抗体；

所述金标垫上喷涂鼠抗地高辛抗体的胶体金，检测线上包被链霉亲合素，链霉亲合素浓度为2mg/mL，质控线上包被羊抗鼠二抗；

所述样品垫为玻璃纤维，各部分重叠部分为2-10mm，在检测试纸下部安装PVC背板；

快速检测试纸使用上样展开液为添加0.1% BSA和0.1% Tween 20的PBS缓冲液，pH7.4。

2.一种权利要求1所述的试剂盒沙门氏菌核酸非诊断目的的快速检测方法，其特征在于：其包括如下步骤：

⑴将鼠抗地高辛抗体作为金标抗体吸附于显色物质胶体金颗粒上，形成稳定结构的结合体固定在金标垫上；

⑵链霉亲和素作为标记物生物素的配体物质以线状形式包被在硝酸纤维素膜上形成检测线；

⑶将羊抗鼠抗体同样以线状形式包被在质控线上结合过多的金标抗体；

⑷正向引物5’端和反向引物5’端分别用地高辛和生物素修饰，当存在待测沙门核酸扩增产物时，在恒温条件下进行核酸的扩增反应得到同时连接两种标记物地高辛-目标片段-生物素的扩增产物；

⑸将步骤⑷产生的地高辛-目标片段-生物素首先与金标垫上胶体金颗粒包被的地高辛抗体结合，形成地高辛抗体-地高辛-目标片段-生物素显色颗粒复合体；

⑹步骤⑸得到的显色颗粒复合物在上样缓冲液中通过毛细管作用沿纤维素膜向上移动至检测线被受体链霉亲合素捕获得到地高辛抗体-地高辛-目标片段-生物素-链霉亲合素复合体，在检测线上沉降形成肉眼可视的显色条带，且未结合扩增产物的胶体金颗粒上包被的金标抗体与质控线上的羊抗鼠抗体结合，出现两条显色条带即为阳性结果；

或者，当不存在沙门核酸扩增产物时，不发生上述步骤⑸-⑹，不能与金标垫上胶体金颗粒包被的地高辛抗体结合，显色物质胶体金颗粒不能与检测线上包被的物质结合形成显色条带，质控线上的羊抗鼠抗体与胶体金颗粒上包被的金标抗体结合出现一条显色条带即为阴性结果。