[发明专利]可同时检测单核增生李斯杆菌、金黄色葡萄球菌和屎肠球菌的多重PCR检测方法有效
| 申请号： | 201611116199.X | 申请日： | 2016-12-07 |
| 公开（公告）号： | CN106636382B | 公开（公告）日： | 2020-10-09 |
| 发明（设计）人： | 刘昆;宋越;刘威;张月梅;裴乐;陈伟;赵世华 | 申请（专利权）人： | 内蒙古自治区农牧业科学院 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/14;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 010031 内蒙古自治区呼和浩特*** | 国省代码： | 内蒙古;15 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 同时 检测 单核 增生 杆菌 金黄色 葡萄球菌 球菌 多重 pcr 方法 | ||
1.用于同时检测单核细胞增多性李斯杆菌、金黄色葡萄球菌与屎肠球菌的多重PCR引物，其特征在于为：
hylA-1： 5’-CATATATCTCAAGTGTGGCA-3’；
hylA-2： 5’-GCAATGGGAACTCCTGGTGT-3’；
NUC-1： 5’-GCATCACAAACAGATAACGGCG-3’；
NUC-2： 5’-TAACCGTATCACCATCAATCGC-3’；
ddl-1：5’-GGACCCAAGTGGACAGACAG-3’；
ddl-2：5’-CTTCACCAGGCAAAGTCGTC-3’；
所述多重PCR反应条件为：94℃5min，94℃30s，59℃45s，72℃1min，共计35个循环，72℃终延伸5min；引物NUC-1、NUC-2、hylA-1、hylA-2、ddl-1、ddl-2浓度均为10μmol/μL。
2.如权利要求1的多重PCR引物，其特征在于：引物对扩增的基因分别为单增性李斯杆菌Hyl基因、屎肠球菌ddl基因、金黄色葡萄球菌NUC基因。
3.采用权利要求1中的引物用于同时检测单核细胞增多性李斯杆菌、金黄色葡萄球菌与屎肠球菌的多重PCR方法，所述方法以非诊断为目的，其特征在于：
a.制备被检测物的DNA模板并置于反应管中；
b.将权利要求1中所述的单核细胞增多性李斯杆菌、金黄色葡萄球菌和屎肠球菌引物放入a步骤的反应管中进行多重PCR反应；
所述多重PCR反应条件为：94℃5min，94℃30s，59℃45s，72℃1min，共计35个循环，72℃终延伸5min；引物NUC-1、NUC-2、hylA-1、hylA-2、ddl-1、ddl-2浓度均为10μmol/μL。
4.如权利要求3的多重PCR方法，其特征在于：各引物的体积均为0.5μL；模版体积为1μL；去离子水为6μL；Premix Taq体积为10μL。
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