[发明专利]干细胞组合物在皮肤损伤治疗药物中的应用

权利要求书

1.试剂盒在制备药物中的用途，其特征在于，所述药物用于治疗全层皮肤损伤，所述试剂盒，包括：

第一试剂，所述第一试剂包括外泌体和细胞因子；以及

第二试剂，所述第二试剂包括生物支架和干细胞。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述细胞因子包括下列至少之一：

碱性成纤维生长因子；以及

表皮生长因子。

3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述试剂盒包括：

2～100μg/ml的外泌体；

10～50ng/ml的碱性成纤维生长因子；

10～50ng/ml的表皮生长因子；

生物支架；以及

间充质干细胞，所述间充质干细胞以1×105～1×106个细胞/cm2的密度负载于所述生物支架上，

优选地，所述试剂盒包括：

2～50μg/ml的外泌体；

10～30ng/ml的碱性成纤维生长因子；

10～30ng/ml的表皮生长因子；

生物支架；以及

间充质干细胞，所述间充质干细胞以1.5×105～8×105个细胞/cm2的密度负载于所述生物支架上，

更优选地，

所述试剂盒包括：

5μg/ml外泌体；

10ng/ml的碱性成纤维生长因子；

20ng/ml的表皮生长因子；

生物支架；以及

间充质干细胞，所述间充质干细胞以5×105个细胞/cm2的密度负载于所述生物支架上。

4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述外泌体是通过下列步骤所得到的：

将间充质干细胞接种于含有细胞生长培养基的细胞培养皿中，进行培养至所述间充质干细胞处于生长对数期且细胞汇合度达到90％以上，将细胞生长培养基更换为外泌体收集培养基，添加量为6ml/皿，于37℃，5％二氧化碳培养条件下培养细胞48小时，收集培养液；

将所述培养液于4℃，300g离心10分钟，收集第一上清液；

将所述第一上清液于4℃，2000g离心10分钟，收集第二上清液；

将所述第二上清液于4℃，10000g离心30分钟，收集第三上清液；

将所述第三上清液于4℃，110000g离心2小时，收集第一沉淀物；

用35ml PBS缓冲液重悬所述第一沉淀物，并于4℃，110000g离心2小时，收集第二沉淀物；以及

用100～200μl PBS缓冲液重悬所述第二沉淀物，以便得到所述外泌体。

5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述外泌体及细胞因子是以混合溶液的形式提供的，优选地，所述混合溶液的溶剂为生理盐水。

6.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述干细胞为通用型干细胞，

所述通用型干细胞包括：脂肪源性干细胞、骨髓源性干细胞或脐带源性干细胞，优选脐带源性干细胞，

所述生物支架包括：胶原蛋白、蚕丝蛋白或壳聚糖，优选胶原蛋白。

7.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述第二试剂是通过包括下列步骤所得到的：

将所述干细胞接种于与所述生物支架相接触的培养基中，进行培养，以便得到所述第二试剂。