[发明专利]一种硫酸多粘菌素E组分纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体地涉及硫酸多粘菌素E组分纯化方法。

背景技术

多粘菌素E是一个由多种组份组成的多肽类抗生素，主要由E2和E1组成。在20世纪 50年代，多粘菌素E就应用于临床，主要用于革兰氏阴性菌引起的感染，特别是由多重耐药 绿脓杆菌、鲍氏不动杆菌等引起感染的治疗。

自上世纪80年代开始因高发的肾脏毒性和神经毒性，多粘菌素E的应用受到限制， 并几乎被临床弃用。但是近年来，由于革兰氏阴性菌耐药株尤其是多耐药菌株感染病例的 出现以及新药开发有限的情况下多粘菌素E再次引起了全球医疗界的重视。同样如何提高 多粘菌素E的抗菌活性、降低其毒性从而扩大临床适用人群也成为了药学研究者所面临的 技术难点。

众所周知多组份药物制剂的稳定性较难控制，特别是对于注射剂而言多组分药物 的理化稳定性、渗透压、澄明度、酸碱度等方面因易受组分间相互作用，不容易形成稳定的 药物制剂，并且由于储存、温度、光照等因素多组份药物制剂更容易出现变色、沉淀、分解等 变化。此外，多组分药物的有效性和潜在的安全性也存在一定的缺陷。另外，多组份药物由 于组份间的化学结构差异会导致它们在体内的药代动力学行为的差异，增加了药代动力学 研究的难度，从而对设计安全的药物剂量以及合理的给药方式带来技术障碍。因此，发明一 种纯化多粘菌素E的方法，获得E1和E2组分纯化物是非常必要的。

凝胶技术是利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，根据被分离物质的分子大小 不同来进行分离。凝胶介质是某些惰性的多孔网状结构物质，多是交联的聚糖(如葡聚糖或 琼脂糖)类物质，小分子物质能进入其内部，流下时路程较长，而大分子物质却被排除在外 部，下来的路程短，当一混合溶液通过凝胶过滤层析柱时，溶液中的物质就按不同分子量筛 分开了。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种硫酸多粘菌素E组分纯化方法，旨在根据 多粘菌素E2和E1分子量的不同，利用凝胶技术得到硫酸多粘菌素E2组分和E1组分纯化物， 纯化含量大于等于80％，甚至可以大于等于90％。

为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是：一种硫酸多粘菌素E组分纯化 方法，其特征在于：包括以下步骤：

(a)将硫酸多粘菌素E用水溶解，上样于凝胶介质；

(b)待步骤(a)完成后用有机溶剂洗脱，分段收集、合并含硫酸多粘菌素E2和E1的 洗脱液；

(c)取步骤(b)中合并后的洗脱液，去除有机溶剂后用硫酸调节pH值；

(d)待步骤(c)完成后喷雾干燥，即得硫酸多粘菌素E2组分和E1组分的纯化物。

进一步的技术方案在于，所述凝胶介质采用葡聚糖凝胶，型号为G-10、G-15、G-25 中的一种或多种。

进一步的技术方案在于，所述凝胶介质的载样量为30g/L-60g/L。

进一步的技术方案在于，所述凝胶介质的载样量为优选为30g/L-40g/L。

进一步的技术方案在于，所述有机溶剂为甲醇、氯仿或乙腈，其浓度为20-45％。

进一步的技术方案在于，所述有机溶剂为甲醇溶液，其浓度为30-40％。

进一步的技术方案在于，所述步骤(b)的具体步骤为：待步骤(a)完成后用配置好 的有机溶剂，以0.8～1.2BV/h的流速进行洗脱，当用0.25％的磷钨酸滴定有白色沉淀时开 始收集，每1小时的出样收集为一组出样小组，直至用0.25％的磷钨酸滴定无白色沉淀；每 组出样小组均进行液相检测，将含硫酸多粘菌素E2的组分含量以及含硫酸多粘菌素E1的组 分含量均大于85％的出样小组进行合并。

进一步的技术方案在于，所述步骤(c)具体步骤为：取步骤(b)中合并后的洗脱液， 采用真空薄膜蒸发法去除有机溶剂，其温度为40-60℃；然后用硫酸溶液调节pH值为3.4- 4.4。

进一步的技术方案还在于，步骤(d)中喷雾干燥进风温度130-190℃，出风温度90- 110℃。

采用上述技术方案所产生的有益效果在于：本发明中利用凝胶进行操作，由于其 属于惰性载体，不带电荷，吸附力弱，操作条件比较温和，对多粘菌素E2和E1组分不造成任 何破坏，所以最大程度的保护了多粘菌素E2和E1组分，其纯化物含量可达90％。

附图说明

下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。