[发明专利]一种食品中核苷酸的高效液相色谱检测法

说明书

本发明公开了一种食品中核苷酸的高效液相色谱检测法，首先样品前处理：称取待测样品，加入水，用乙酸调节pH至4～5，涡旋5~10min后，加入乙醇溶液，蜗旋5~10min后8000~12000r/min离心5~15min，用乙醇溶液洗涤，55~70℃旋干，用水定容，取0.5~2mL过0.22μm滤膜于进样瓶中，供上机分析；接着进行高效液相色谱检测。本发明以乙酸与乙醇作为共沉淀剂，应用SB‑AQ柱和四丁基硫酸氢铵分离和检测核苷酸，方法的平均回收率为82.44%～98.92%，相对标准偏差为0.60%～2.27%，且该方法可同时检测奶粉、米粉和奶米粉中的核苷酸，适合多种产品，适用范围广，应用前景好。

技术领域

本发明属于食品检测技术领域。更具体地，涉及一种食品中核苷酸的高效液相色谱检测法。

背景技术

核苷酸是构成核酸的成分，是由含氮的碱基、核糖或脱氧核糖、磷酸3种分子连接而成。核苷酸在人体内广泛分布，具有多种生物学功能。核苷酸发挥生理功能离不开五碳糖的重要结构也即核苷。由于牛乳和母乳中的核苷酸质量浓度差距较大，母乳中含有多种核苷和核苷酸，而牛奶中一般不含有，所以目前在乳制品中添加核苷酸主要用于婴幼儿配方奶粉中。在婴儿配方奶粉中添加的核苷酸种类主要有以下5种：胞嘧啶核苷酸(cytidine，CMP)；尿嘧啶核苷酸(uridine，UMP)；腺嘌呤核苷酸(adenosine，AMP)；鸟嘌呤核苷酸(ganosine，GMP)；次黄嘌呤核苷酸(inosine，IMP)；其主要生理功能是广泛参与人体的能量代谢、蛋白质合成，具有提高各种酶的活性、活化细胞功能、促进抗体形成、增强免疫功能的作用。它们可促进神经细胞的生长发育，是与“神经生长因子”有关或者可以作为神经生长物质利用的营养成分。核苷酸是婴儿的条件必需营养素，对婴儿的生长发育有重要的作用。另外，一些临床上的研究发现，添加核苷酸的婴儿配方奶粉可减少腹泻的发生及促进较小胎儿的生长发育。

但是，人体对核苷酸的需求是有一定限度的，并非越多越好。我国还没有关于婴幼儿食品和乳品中核苷的相关国家标准。目前，许多企业特别是国外独资或合资，以及我国大型乳品企业的标准中核苷酸都作为重要指标，所以对婴儿配方奶粉和米粉产品中核苷酸的质量监控极为重要，这就需要相应的检测技术支持。

但是，目前我国对于婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定方法并未制定国家标准。虽然目前有关核苷酸检测的报道较多，可检索到大量分析的报道，但食品分析集中在味精和肉等方面，有些方法的前处理尚不成熟。而婴儿配方奶粉是婴儿食用辅食前的唯一食物，对于其健康生长关系很大。目前报道的检测方法主要有比色法、离子交换色谱法、毛细管电泳法、液相色谱法、液相色谱质谱联用法等。比色法应用较早，但需要排除干扰、操作烦琐。离子交换色谱法、毛细管电泳法测定结果重现性不佳。液相色谱质谱联用法存在仪器价格昂贵，基质干扰大、检测成本高的缺点。

发明内容

本发明要解决的技术问题是针对现有技术中婴幼儿乳基制品和淀粉基制品中核苷酸检测技术的缺陷和不足，提供一种检测奶粉和米粉中核苷酸的方法，该方法优化了前处理方法，去除大量的杂质后，应用水相C-18柱，摸索采用最佳的流动相，有效将杂质与目标化合物分开，使得婴幼儿配方奶粉中核苷酸检测的难题得以解决。

本发明的目的是提供一种食品中核苷酸的高效液相色谱检测法。

本发明另一目的是上述方法在检测食品(尤其是婴幼儿奶粉，如奶粉和米粉)中核苷酸方面的应用。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

一种食品中核苷酸的高效液相色谱检测法，包括如下步骤：

S1.样品前处理：称取待测样品，加入水，调节pH至4～5，涡旋5～10min后，加入乙醇溶液，蜗旋5～10min后8000～12000r/min离心5～15min，用乙醇溶液洗涤，55～70℃旋干，用水定容，取0.5～2mL过0.22μm滤膜于进样瓶中，供上机分析；

S2.进行高效液相色谱检测。