[发明专利]幽门螺杆菌定性和定量多重基因检测体系及其试剂盒和应用有效
| 申请号： | 201610070235.7 | 申请日： | 2016-02-02 |
| 公开（公告）号： | CN105441582B | 公开（公告）日： | 2019-02-26 |
| 发明（设计）人： | 张艳梅;赵虎;项平;胡彬婕;赵付菊;周丽芳;吴勇;王诗雯;缪应新;方毅;季大年;黄任翔;陈洁;徐玲丽;孔咪咪;张景皓;姜文荣;陈飞 | 申请（专利权）人： | 华东医院;宁波海尔施基因科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6851;C12Q1/6858;C12Q1/06;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 常州金之坛知识产权代理事务所(普通合伙) 32317 | 代理人： | 蒋欣 |
| 地址： | 200040 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 幽门螺杆菌 多重基因 试剂盒 定性 定量分析 菌种鉴定 检测 幽门螺杆菌感染 诊断与鉴别诊断 定量检测体系 常规细菌 多对引物 分离培养 检测结果 疗效观察 组织样本 低成本 基因 应用 参考 | ||
1.一种幽门螺杆菌定性和定量多重基因检测体系，其特征在于：包括对菌种鉴定基因16S rRNA进行检测的引物,以及分别对幽门螺杆菌的拷贝数进行定量分析的基因ureC和ß-globin进行检测的引物；
所述各引物的正向引物的5’端均设有正向通用引物序列，所述各引物的反向引物的5’端均设有反向通用引物序列；
针对16S rRNA基因的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，针对16S rRNA基因的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；
针对ureC基因的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.33所示，针对ureC基因的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.34所示；
针对ß-globin基因的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.35所示，以及针对ß-globin基因的反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.36所示；
所述正向通用引物的核苷酸序列如SEQ ID No.37所示；
所述反向通用引物的核苷酸序列如SEQ ID No.38所示。
2.根据权利要求1所述的幽门螺杆菌定性和定量多重基因检测体系，其特征在于：针对16S rRNA和ureC基因的正向引物在检测体系中的终浓度均为200nM；针对16S rRNA、ureC和ß-globin基因的反向引物在检测体系中的终浓度均为100nM；针对ß-globin基因的正向引物在检测体系中的终浓度为100nM。
3.根据权利要求1或2所述的幽门螺杆菌定性和定量多重基因检测体系，其特征在于：还包括PCR缓冲液、MgCl2溶液、dNTPs、热启动DNA聚合酶、带荧光的通用标签混合物和DNA模板；所述带荧光的通用标签混合物中包括反向通用引物和带有荧光标记的正向通用引物。
4.根据权利要求3所述的幽门螺杆菌定性和定量多重基因检测体系，其特征在于：所述荧光标记为CY5或CY3或FAM。
5.根据权利要求4所述的幽门螺杆菌定性和定量多重基因检测体系，其特征在于：还包括阳性对照液和阴性对照液；所述阳性对照液是包括所有目的基因靶点的质粒混合物；所述阴性对照液是无核酸酶超纯水。
6.根据权利要求4所述的幽门螺杆菌定性和定量多重基因检测体系，其特征在于：反应时体系中的组分用量为10×的PCR缓冲液1体积，带荧光的通用标签混合物和2mmol/L的dNTPs共1体积，25mmol/L的MgCl2溶液2体积，引物混合物1体积，5U/μL的热启动DNA聚合酶1体积， DNA模板2体积，纯水2体积；所述DNA模板的使用量为5～50ng/体系。
7.一种采用如权利要求1所述的检测体系的幽门螺杆菌定性和定量多重基因检测试剂盒。
8.一种采用如权利要求1所述的检测体系制备幽门螺杆菌的检测和诊断产品的应用。
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