[发明专利]使用检测剂、探针和抑制剂检测核酸靶标

说明书

本发明总体上是关于用于检测特定核酸序列的存在或不存在的方法。本发明总体上涉及将检测剂并入靶核酸中、向所述反应中添加寡核苷酸探针、聚合酶和抑制剂、以及检测所述抑制剂对所述寡核苷酸探针的干扰作为特定靶核酸序列存在的指标，以及包含其的试剂盒。

本申请为申请日是2011年12月7日、申请号是201180058333.4(PCT/US2011/063654)、发明名称为“使用检测剂、探针和抑制剂检测核酸靶标”的中国申请的分案申请。

相关申请和以引用的方式并入

本申请主张2010年12月7日提交的美国临时专利申请序号61/420,747的优先权。

上述申请和其中引用的或在其审查期间引用的所有文献(“申请引用的文献”)和申请引用的文献中引用或参考的所有文献，以及本文引用或参考的所有文献(“本文引用的文献”)，以及本文引用的文献中引用或参考的所有文献，连同本文或任何以引用的方式并入本文的文献中提到的任何产品的任何制造商指导书、说明书、产品说明和产品介绍单均在此以引用的方式并入本文，并且可以在本发明的实践中采用。更具体地讲，以引用的方式并入所有参考的文献其程度如同特别地和单独地指出以引用的方式并入每个单独的文献。

发明领域

本发明属于生物技术的技术领域。更具体地讲，本发明属于分子生物学的技术领域。

联邦基金代号

本发明部分由国家卫生研究院授予号：1R43HG005144-01资助。联邦政府可以享有本发明的某些权利。

发明背景

在分子生物学中的大多数过程中，具备考虑检测特定事件发生的能力的反应是至关重要的。例如，诸如在延伸引物上并入一个或多个核苷酸等事件可能表示存在单核苷酸多态性。在发生某种事件如并入一个或多个核苷酸时，可以将用于检测的机制构建到反应中或(作为替代)在随后的反应中使用，从而提供指示事件发生的方法。

单碱基链延伸(借此并入单个二-脱氧核苷酸，它可以含有用于检测的染料(或使用质量作为检测方法))是同时含有用于核酸的询问(interrogation)和检测机制的反应的实例。检测单核苷酸延伸的最简单的方式之一就是荧光，例如，使用荧光标记的核苷酸或FRET(荧光共振能量传递)信号。然而，单碱基链延伸成本高，因为它需要使用荧光标记的核苷酸和/或探针。此外，为了使反应进行，探针和核苷酸两者的浓度必须要高，这就导致高的背景信号。因此，必须采用多个严格的冲洗步骤来除去未杂交或未结合的材料，这对大多数应用来说是不现实的，特别是使用小反应容器时。

基于荧光的检测的另一个表现是利用荧光标记分子(荧光团)和淬灭团。如上所述，当用多个分子操作时，荧光分子的浓度就信号而言可能是有问题的。