[发明专利]一株有效降解亚硝酸盐的解淀粉芽孢杆菌

说明书

技术领域

本发明涉及利用微生物进行环境治理方面，属于生物工程技术领域。具体涉及一株可降解亚硝酸盐的解淀粉芽孢杆菌。

背景技术

亚硝酸盐作为氧化剂应用于工业和建筑业，也可作为发色剂及防腐剂限量应用于肉制品，然而亚硝酸盐可引发婴儿高铁血红蛋白症，婴儿先天畸形，甲状腺肿并与蛋白质分解产物二级胺反应生成强致癌物亚硝胺。水体及食品中亚硝酸盐有限量标准。

在水产养殖业方面，随着养殖水平的不断提高，养殖密度的不断加大，对池塘的投入也在不断地增加，水体的负载大都达到或超过饱和程度，进而使水体的理化条件不断恶化。水体中的氨氮、亚硝态氮(亚硝酸盐)等有毒有害物质大量产生，致使养殖鱼类容易中毒死亡，往往给养殖户带来比较惨重的损失。

微生物降解法被认为是减少或消除有害化合物污染的有效方法，筛选有效降解亚硝酸盐的食品安全性微生物是实现减少或消除水体及发酵食品中亚硝酸盐含量的有效方法。

发明内容：

本发明的目的是提供一株可有效降解亚硝酸盐的菌株—解淀粉芽孢杆菌。(BacillusamyloliquefaciensH47)。

本发明所提供的降解菌株为解淀粉芽孢杆菌(BacillusamyloliquefaciensH47)保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地点武汉市武昌珞珈山武汉大学，保藏编号为CCTCCM2013283，保藏日期2013年6月24日。

所述解淀粉芽孢杆菌降解亚硝酸盐的步骤为：1)菌株H47种子液的制备。取保藏于-80℃甘油管的种子液50μL于装有50mLLB培养基250mL三角瓶中,于30℃200r/min摇床培养。

2)菌株H47降解亚硝酸盐的测定：准确移取0.5mL均匀活化种子液于装有50mLLB培养基(含150mg/LNaNO2)的250mL三角瓶中。30℃培养，定时取样。得发酵液上清，按照GB5009.33—2010所述方法2——分光光度法(略微改动)对发酵液中亚硝酸盐含量进行测定。

3)所述发酵液上清获得方法为发酵液在8000r/min离心机下离心，获得上清。

4)所述分光光度法测定发酵液中亚硝酸盐含量的方法为：取3mL上清液加去离子水至28.5mL，加亚铁腈化钾(106g/L)0.75mL，乙酸锌溶液(106g/L)0.75mL，混匀反应30min。8000r/min离心10min。取20mL上清于25mL比色管中加2mL对氨基苯磺酸钠溶液(4g/L)颠倒均匀反应3min再加1mL盐酸萘乙二胺溶液(2g/L)，用去离子水定容至25mL，颠倒均匀，反应15min，于波长538nm处测吸光度。

本发明所用的培养基为LB培养基：胰蛋白胨10g，酵母浸提物5g，NaCl10g，加水定容至1L，调pH为7.1±0.1，115℃灭菌20min。

与其他技术相比，该发明的积极效果在于：解淀粉芽孢杆菌是公认的生物安全菌，对人畜无毒无害，不污染环境。其代谢产物较为丰富，具有广谱抗菌活性和较强的抗逆能力，生长快，稳定性较好。该菌可降解亚硝酸盐，具有速度快，费用低，操作步骤简单等优点，为减少水体中亚硝酸盐含量提供了良好的菌源及思路。

附图说明：

图1为降解菌株H47作用于150mg/L的亚硝酸钠的降解曲线。

图2为降解菌株H47对不同浓度亚硝酸钠的降解能力。

具体实施方式：

下面结合实施例对本发明进行进一步描述。以下实施例仅为本发明的几个具体实施例，但本发明的设计构思并不局限于此，凡利用此构思对本发明进行非实质性的改动，均应属于侵犯本发明保护范围的行为。

实施例1：不同培养时间对菌株H47降解亚硝酸盐的情况。

菌种H47种子液的制备：取保藏于-80℃甘油管的种子液50μL于装有50mLLB培养基250mL三角瓶中,于30℃，200r/min摇床培养。

准确移取0.5mL均匀活化种子液于装有50mLLB培养基(含150mg/LNaNO2)的250mL三角瓶中。30℃培养，定时取样。得发酵液上清，按照GB5009.33—2010所述方法2——分光光度法(略微改动)对发酵液中亚硝酸盐含量进行测定。以不接H47菌株的含150mg/L的亚硝酸钠的LB培养基作空白对照。菌株H47作用于含150mg/L的亚硝酸钠LB培养基，对亚硝酸钠的降解曲线如图1所示。菌株H47对亚硝酸钠有明显的降解作用，12h对亚硝酸钠的降解率可达99.77％。