[发明专利]错折叠蛋白质的检测

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求2014年9月11日提交的美国临时专利申请No.62/049,306的优先权，该临时专利申请的全部内容以引用方式并入本文。

背景

蛋白质错折叠病症(PMD)包括：阿尔茨海默氏病、帕金森氏病、2型糖尿病、亨延顿氏舞蹈病、肌萎缩性侧索硬化、系统性淀粉样变性、朊病毒病等。不同蛋白质的错折叠聚集体可形成并且积聚。除了其他效应外，错折叠聚集体可诱发细胞功能障碍和组织损伤。

例如，阿尔茨海默氏病(AD)和帕金森氏病(PD)是无有效治疗或准确临床前诊断的退行性脑障碍。在AD中，例如，迄今的证据表明，淀粉样-β蛋白(Aβ)的错折叠、聚集和脑沉积可为AD病状的触发因素。虽然Aβ斑块最初被认为是疾病的标志，但当前的研究表明，可溶性Aβ低聚物可能是引起AD中神经变性的关键突触-毒性物质。因为大脑的再生能力低，所以PMD的早期诊断对于允许在发生不可逆神经病理变化之前进行干预而言是至关重要的。若干条证据表明，错折叠和低聚过程可以在临床症状和实质性脑损伤发作前的几年或几十年开始。缺乏广泛接受的早期、灵敏以及客观的实验室诊断对于罹患PMD患者的护理而言仍然是主要问题。

本申请意识到，对蛋白质错折叠进行检测(例如)以诊断相关疾病可能是一项充满挑战性的工作。

概述

在一个实施方案中，提供了一种用于确定样品中可溶性错折叠蛋白质的存在的方法。所述方法可包括使样品与单体折叠蛋白质接触以形成孵育混合物。所述方法可包括进行孵育循环两次或更多次以有效形成错折叠蛋白质的扩增部分。每个孵育循环可包括对孵育混合物进行孵育以在可溶性错折叠蛋白质的存在下有效引起单体折叠蛋白质的至少一部分的错折叠和/或聚集。每个孵育循环可包括物理地破坏孵育混合物以有效分解所存在的任何蛋白质聚集体的至少一部分，例如以释放可溶性错折叠蛋白质。所述方法可包括通过检测可溶性错折叠蛋白质的至少一部分来确定样品中可溶性错折叠蛋白质的存在。可溶性错折叠蛋白质可包括下列的一种或多种：可溶性错折叠单体和可溶性错折叠聚集体。错折叠蛋白质的扩增部分可包括下列的一种或多种：可溶性错折叠单体的扩增部分、可溶性错折叠聚集体的扩增部分以及不溶性错折叠聚集体。单体折叠蛋白质和可溶性错折叠蛋白质可排除朊病毒蛋白质(PrP)及其同种型。

在另一个实施方案中，提供了一种用于确定样品中可溶性错折叠蛋白质的存在的方法。所述方法可包括使样品与硫磺素T和摩尔过量的单体折叠蛋白质接触以形成孵育混合物。所述摩尔过量可大于样品中的可溶性错折叠蛋白质中所包括的蛋白质单体的量。所述方法可包括进行孵育循环两次或更多次以有效形成错折叠蛋白质的扩增部分。每个孵育循环可包括对孵育混合物进行孵育以在可溶性错折叠蛋白质的存在下有效引起单体折叠蛋白质的至少一部分的错折叠和/或聚集，从而形成错折叠蛋白质的扩增部分。每个孵育循环可包括振荡孵育混合物以有效分解所存在的任何蛋白质聚集体的至少一部分，例如以释放可溶性错折叠蛋白质。所述方法还可包括通过检测与可溶性错折叠蛋白质对应的硫磺素T的荧光来确定样品中可溶性错折叠蛋白质的存在。可溶性错折叠蛋白质可包括下列的一种或多种：可溶性错折叠单体和可溶性错折叠聚集体。错折叠蛋白质的扩增部分可包括下列的一种或多种：可溶性错折叠单体的扩增部分、可溶性错折叠聚集体的扩增部分以及不溶性错折叠聚集体。单体折叠蛋白质和可溶性错折叠蛋白质排除朊病毒蛋白质(PrP)及其同种型。