[发明专利]错折叠蛋白质的检测

权利要求书

1.一种用于确定样品中可溶性错折叠蛋白质的存在的方法，其包括：

使所述样品与对应于所述可溶性错折叠蛋白质的单体折叠蛋白质接触以形成孵育混合物；

进行孵育循环两次或更多次以有效形成错折叠蛋白质的扩增部分，每个孵育循环包括：

对所述孵育混合物进行孵育以在所述可溶性错折叠蛋白质的存在下有效引起所述单体折叠蛋白质的至少一部分的错折叠和/或聚集；

物理地破坏所述孵育混合物以有效分解所存在的任何蛋白质聚集体的至少一部分；和

通过检测所述可溶性错折叠蛋白质的至少一部分来确定所述样品中所述可溶性错折叠蛋白质的存在，

所述可溶性错折叠蛋白质包括下列的一种或多种：可溶性错折叠单体和可溶性错折叠聚集体；并且

所述错折叠蛋白质的扩增部分包括下列的一种或多种：所述可溶性错折叠单体的扩增部分、所述可溶性错折叠聚集体的扩增部分以及不溶性错折叠聚集体，

前提条件是所述单体折叠蛋白质和所述可溶性错折叠蛋白质排除朊病毒蛋白质(PrP)及其同种型。

2.根据权利要求1所述的方法，

其还包括使所述可溶性错折叠蛋白质的指示剂与所述孵育混合物接触，所述可溶性错折叠蛋白质的指示剂的特征为在存在所述可溶性错折叠蛋白质时的指示状态以及在不存在所述可溶性错折叠蛋白质时的非指示状态；并且

其中所述确定所述样品中所述可溶性错折叠蛋白质的存在包括检测所述可溶性错折叠蛋白质的所述指示剂的所述指示状态。

3.根据权利要求2所述的方法，所述指示剂的所述指示状态和所述指示剂的所述非指示状态的特征为荧光的差异，所述确定所述样品中所述可溶性错折叠蛋白质的存在包括检测荧光的所述差异。

4.根据权利要求2所述的方法，其包括使摩尔过量的所述可溶性错折叠蛋白质的所述指示剂与所述孵育混合物接触，所述摩尔过量大于所述孵育混合物中的所述单体折叠蛋白质和所述可溶性错折叠蛋白质中所包括的蛋白质单体的总摩尔量。

5.根据权利要求2所述的方法，所述可溶性错折叠蛋白质的指示剂包括下列的一种或多种：硫磺素T、刚果红、m-I-均二苯代乙烯、柯胺G、PIB、BF-227、X-34、TZDM、FDDNP、MeO-X-04、IMPY、NIAD-4、发光共轭聚噻吩、荧光蛋白及其衍生物。

6.根据权利要求1所述的方法，所述确定所述样品中所述可溶性错折叠蛋白质的存在包括确定所述样品中所述可溶性错折叠蛋白质的量。

7.根据权利要求6所述的方法，其包括以下列中至少约一个或多个的敏感性来检测所述样品中所述可溶性错折叠蛋白质的量：80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％。

8.根据权利要求6所述的方法，其包括检测所述样品中所述可溶性错折叠蛋白质的量，所述量小于下列中的约一个或多个：100nmol、10nmol、1nmol、100pmol、10pmol、1pmol、100fmol、10fmol、3fmol、1fmol、100attomol、10attomol和1attomol。

9.根据权利要求6所述的方法，其包括以与所述样品中所含的单体折叠蛋白质的摩尔比率来检测所述样品中所述可溶性错折叠蛋白质的量，所述摩尔比率小于下列中的约一个或多个：1:100、1:10,000、1:100,000和1:1,000,000。

10.根据权利要求1所述的方法，其包括以下列中至少约一个或多个的特异性来检测所述样品中的所述可溶性错折叠蛋白质：80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％。

11.根据权利要求1所述的方法，其包括制备包含浓度为下列中一个或多个的所述单体折叠蛋白质的所述孵育混合物：介于约1nM和约2mM之间；介于约10nM和约200μM之间；介于约100nM和约20μM之间；介于约1μM和约10μM之间；约7μM；和约2μM。