[发明专利]一种荔枝霜疫霉菌分子检测引物及其检测方法有效

专利信息
申请号: 201510820020.8 申请日: 2015-11-24
公开(公告)号: CN105349655B 公开(公告)日: 2018-10-30
发明(设计)人: 李本金;陈庆河;刘裴清;刘小丽;黄宏臻;翁启勇 申请(专利权)人: 福建省农业科学院植物保护研究所
主分类号: C12Q1/6895 分类号: C12Q1/6895;C12Q1/686;C12Q1/04;C12R1/645
代理公司: 福州元创专利商标代理有限公司 35100 代理人: 蔡学俊
地址: 350013 福建省福*** 国省代码: 福建;35
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摘要:
搜索关键词: 一种 荔枝 霉菌 分子 检测 引物 及其 方法
【权利要求书】:

1.一种荔枝霜疫霉菌分子检测的PCR引物,其特征在于,引物序列为:

PvYF1:5’-GTCCGAGTTTCTAGCAGATTG-3’;

PvYR1:5’-ACGATAATACCGTGAGCGCC-3’;

上述引物PvYF1/PvYR1对荔枝霜疫霉菌特异性扩增出249bp的产物。

2.如权利要求1所述荔枝霜疫霉菌分子检测PCR引物的检测方法,包括

(1)从荔枝霜疫霉菌、被荔枝霜疫霉菌感染的植株中提取DNA;

(2)以该DNA为模板用权利要求1中所述的引物PvYF1/PvYR1通过聚合酶链式反应(PCR)扩增:PCR反应体系25.0μL,包括2×Taq PCR Master Mix12.5μL,10 μmol/L 的引物各0.5μL, DNA模板25ng,不足部分由dd H2O补足;PCR反应条件为:95℃预变性3min;94℃变性1min,59℃退火30sec ,72℃延伸1min,共28个循环;72 ℃延伸10 min;

(3)然后取步骤(2)的PCR扩增产物用琼脂糖凝胶电泳分离,经溴化乙锭染色后于紫外灯下观察,根据扩增产物的大小判定结果,如果能特异性地扩增出249bp的产物,即可判断所述的植株样品中存在荔枝霜疫霉菌。

3.如权利要求1所述荔枝霜疫霉菌分子检测的PCR引物在田间荔枝霜疫霉病早期诊断和病菌的监测和鉴定上的应用。

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