[发明专利]基于AgNCs/HpDNA探针的microRNA SDA检测用SDA反应液有效
| 申请号： | 201510705114.0 | 申请日： | 2015-10-26 |
| 公开（公告）号： | CN105274227B | 公开（公告）日： | 2018-12-18 |
| 发明（设计）人： | 崔大祥;张晶璞 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6844 | 分类号： | C12Q1/6844;C12N15/11 |
| 代理公司： | 上海汉声知识产权代理有限公司 31236 | 代理人： | 徐红银;郭国中 |
| 地址： | 200240 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 检测 探针 血浆microRNA标志物 等温扩增反应 反应时间短 发夹 新型分子 荧光增强 新方向 银纳米 垂悬 介导 团簇 胃癌 信标 引物 用料 合成 杂交 | ||
1.一种HpDNA，其特征在于，所述HpDNA的序列如SEQ ID NO：1所示；所述HpDNA含三个区，分别为颈区HpS、环区HpL和3’垂悬区HpRO；其中，垂悬区富含C序列用于合成AgNCs，且HpRO在杂交作用下与互补链中的富G垂悬序列靠近而得到红色荧光增强信号；HpRO序列为5’-CCCTTAATCCCC-3’。
2.一种基于权利要求1所述HpDNA的AgNCs/HpDNA，其特征在于，所述AgNCs/HpDNA通过如下方法制备：
将AgNO3溶液、NaBH4溶液加入HpDNA中，震荡，静置，即得AgNCs/HpDNA。
3.根据权利要求2所述的AgNCs/HpDNA，其特征在于，所述HpDNA、AgNO3、NaBH4的终摩尔浓度之比为1:25:25；
所述震荡的时间为45s-1min；
所述静置具体指于暗环境中室温放置18h。
4.根据权利要求2所述的AgNCs/HpDNA在制备检测胃癌血浆miRNA标志物miR-16-5p用SDA反应液中的应用，所述miR-16-5p的序列如SEQ ID NO：2所示。
5.一种基于权利要求2所述AgNCs/HpDNA的胃癌血浆miRNA标志物miR-16-5p SDA检测用SDA反应液，其特征在于，
所述SDA反应液的总体积为50μL，其中，
所述引物的序列由两个区域组成，分别为颈区互补区PRSc和富G序列垂悬区PO，其序列如SEQ ID NO：3所示；所述颈区互补区序列为5’-TA-3’；所述富G序列垂悬区序列为5’-GGGTGGGGTGGGGTGGGG-3’；
所述缓冲液1×Nb2.1包括50mM NaAc、10mM Tris-HAc、10mM Mg(Ac)2和100μg/mLBSA，缓冲液pH 7.9；
所述检测包括：以所述AgNCs/HpDNA为分子探针，在含富G序列垂悬端的上述引物作用下进行SDA反应，借助富G序列杂交荧光增强效应，在580nm波长激发下，实现miR-16-5p检测。
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