[发明专利]用于虾夷扇贝EST-SSR检测的引物及其分子标记方法

说明书

技术领域

本发明涉及用于虾夷扇贝EST-SSR检测的引物及其分子标记方法。

背景技术

虾夷扇贝(Patinopecten(Mizuhopecten)yessoensis)属软体动物门(Mollusea)，瓣鳃纲(Lamellibranchia)，翼型亚纲(Pterimorphia)，珍珠贝目(Pterioida)，扇贝科(Pectinidae)，虾夷扇贝属(Mizuhopecten)。其形态学特征为：虾夷扇贝的贝壳较大，最大壳高超过20cm，右壳较突出，黄白色，生活时位于下面。左壳稍平，比右壳稍小，呈淡紫褐色，为上壳。壳近圆形。顶壳顶位于中部，壳顶两侧前后具有同样大小的耳状突起。左壳有放射肋15～20条，右壳粗壮放射肋15～20条，每条上又有细放射肋2～4条。贝壳上每年形成一道明显的年轮。右壳的前耳有足丝孔，壳表有15～20条放射肋。右壳肋宽而低矮，肋间狭。左壳肋较细，肋间较宽。壳内面白色，壳顶下方有三角形的内韧带。闭壳肌大，1个，位于中央稍后部。外套膜边缘肥厚，其上有20～30个外套眼和许多的外套触手。软体部外观主要由闭壳肌、外套膜、鳃和内脏囊构成。鳃位于体两侧，各l对，鳃瓣的上行板末端游离。消化腺褐色，位于壳顶的下方闭壳肌的上方。生殖腺1个。

虾夷扇贝分布于朝鲜、俄罗斯远东沿海、千岛群岛南部水域、日本北海道及本州北部，1982年引入我国。在我国主要分布在黄海北部及山东、辽宁等海域，北方的大连和山东等海域形成了一定的养殖规模。虾夷扇贝的个体较大，产量高，肉味鲜美，其闭壳肌含有丰富的营养物质，目前已成为我国主要四大养殖贝类之一。

生长和抗病是贝类生物学研究的两大主题，获得生长快、抗病性高的贝类品种，一直是贝类育种工作者的目标。传统的方法采用多代选育的方法，非常耗费时间和精力，往往获得一个优良性状的贝类品种需要几代科研工作者的辛勤努力。

近年来，在养殖生产中出现的问题说明，虾夷扇贝的种质保护和复壮工作刻不容缓，人工育苗的生产方式有待改进，苗种质量有待提高。

发明内容

本发明的用于虾夷扇贝EST-SSR检测的引物，在检测过程中同时使用该引物，所述的引物共有11组：

第1组引物：其序列如序列表SEQIDNO：1～2所示；

第2组引物：其序列如序列表SEQIDNO：3～4所示；

第3组引物：其序列如序列表SEQIDNO：5～6所示；

第4组引物：其序列如序列表SEQIDNO：7～8所示；

第5组引物：其序列如序列表SEQIDNO：9～10所示；

第6组引物：其序列如序列表SEQIDNO：11～12所示；

第7组引物：其序列如序列表SEQIDNO：13～14所示；

第8组引物：其序列如序列表SEQIDNO：15～16所示；

第9组引物：其序列如序列表SEQIDNO：17～18所示；

第10组引物：其序列如序列表SEQIDNO：19～20所示；

第11组引物：其序列如序列表SEQIDNO：21～22所示。

本发明的一种利用虾夷扇贝EST-SSR的虾夷扇贝分子标记方法，它是按照以下步骤进行的：

一、提取虾夷扇贝的DNA；

二、采用权利要求1的引物组对虾夷扇贝样本进行PCR扩增；

三、对PCR产物进行电泳分析，依据电泳结果对虾夷扇贝进行遗传多样性及其与生长性状分析。

本发明包含以下有益效果：

本发明从扇贝11960个EST序列中查找获得121个微卫星序列，占整个ESTs数据库的1.01％，与从其它物种的ESTs数据库中筛选出来的微卫星序列的比例大体相符。

本发明经过筛选的EST-SSRs可以用于群体遗传分析、生长性状分析、与功能基因连锁标记的筛选等研究，是虾夷扇贝现有微卫星标记量的有效补充，而在一些缺少微卫星标记的种类，EST-SSRs的开发和利用势必推动此种类遗传背景的研究。

本发明检测了11个产生预期扩增片段的微卫星标记在虾夷扇贝养殖群体的多态性。在虾夷扇贝进一步的遗传分析中如果选取更多的样品或不同的种群，可能检测到更高水平的多态。