[发明专利]邻苯二甲酸二乙酯人工免疫原及其制备和用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种邻苯二甲酸二乙酯人工免疫原DEP-BSA及其制备和用途，具体涉及的是一种用于新兴持久性有机污染物——邻苯二甲酸二乙酯免疫检测的邻苯二甲酸二乙酯人工免疫原DEP-BSA及其制备方法和用途。

背景技术

邻苯二甲酸酯类塑化剂(缩写为PAEs)，又称酞酸酯类，是一类由邻苯二甲酸与含有4-15个碳的醇发生费歇尔(Fischer)酯化反应所形成的酯的重要衍生物的统称。这类物质有特殊性气味，毒性较大，一般情况下状态为粘稠液体；液态条件下温度范围宽，流动性大，挥发性低，不溶于水，易溶于大多数有机溶剂。这类物质用途广泛，它不仅可作为食品包装材料、玩具、农药载体、驱虫剂、润滑剂、乙烯地板和壁纸、去泡剂、清洁剂、医用材料(如人工心脏瓣膜等人工器官、血袋、注射器和胶管)和个人护理用品(主要有化妆品、香味品、指甲油、头发喷雾剂、香皂和洗发液)等近千种产品的生产原材料，还常作为塑料增塑剂被用于改造塑料制品性能。

其中，邻苯二甲酸二乙酯(英文名称：Diethylphthalate，简称DEP)，又名酞酸二乙酯，CAS号为84-66-2，分子式为C₁₂H₁₄O₄，分子量为222.24，无色至微黄色澄清油状液体，极易溶解于乙醇，几乎不溶于水；遇明火、高热可燃烧，具有刺激性。该物质低毒，对皮肤、眼睛、上呼吸道有刺激作用；经皮肤吸收或摄入后可引起头痛、头晕和呕吐；具潜在的光毒性、轻度致敏；对女性子宫有影响，可能导致胎儿畸形或死亡^]。由于它能与大多数树脂的相容性比较好，因此，它主要作为树脂的增塑剂而广泛应用；此外，还可作为润滑剂、起泡剂、香水及药用包衣材料的辅料。近些年来，有研究学者发现该物质在食品(如：酒、饮料等)中的含量过高从而危及食品安全，因此便备受人们关注。

目前，关于邻苯二甲酸二乙酯的研究主要集中在水体、沉积物、大气等环境领域和生物体的毒性方面，但样品的检测方法方面研究较少。目前对邻苯二甲酸二乙酯的检测手段主要为气相色谱和高效液相色谱等仪器检测方法，这些方法虽然准确可靠，但对样品的预处理方法和操作人员的专业性有很高的要求。正因为这些方法的处理复杂、耗时、仪器价格昂贵而不适合推广使用，也不利于在环境污染事故现场快速检测。为克服这些缺点，寻求一种快速、简便、灵敏且经济实用的分析方法就成为环境监测领域的主要研究方向。

20世纪60年代发展起来的免疫分析(Immunoassay,IA)是基于抗原和抗体的特异性、可逆性结合反应的分析技术。免疫分析具有常规理化分析技术无可比拟的选择性和高灵敏性，非常适合复杂介质中痕量组分的分析。因此免疫分析具有的特异性强、灵敏度高、方法快捷简单、分析通量大、检测成本低等优点，使得该类方法可以满足简单、快速、灵敏地检测持久性有机污染物的要求。1971年Engvail,VanWeerman等报道了检测体液中微量物质的固相免疫分析技术，即酶联免疫吸附分析法(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)。目前，ELISA方法已经成为免疫分析方法中重要的组成部分。ELISA方法是将抗原-抗体之间的免疫反应与酶的高效催化特性有机结合而发展起来的一种免疫分析方法。其中，以亲和素-生物素信号放大系统为基础的亲和素-生物素化酶联免疫吸附分析法，以生物素标记抗体(抗原)，并以酶标亲和素代替ELISA方法中酶标抗体。亲和素是卵白蛋白中的一种碱性糖蛋白，分子量约为68kDa。一个亲和素分子由4个亚单位组成，每个亚单位都可以与一个生物素分子(分子量为244)特异性结合。生物素与亲和素结合特异性强，其亲和力比抗原抗体反应大得多，亲和常数高达1015M^-1。由于一个亲和素能与4个生物素分子结合，因此在检测中可提高被固相结合酶的数量，进而提高检测方法的灵敏度。

现有技术中，一篇名为“环境激素邻苯二甲酸二甲酯(二乙酯)的荧光免疫分析新方法研究”的硕士论文中公开了一种邻苯二甲酸二乙酯的荧光免疫分析方法，但该方法中免疫原制备方法粗糙，不易重复出来。

目前尚没有亲和素-生物素化酶联免疫吸附分析法检测邻苯二甲酸二乙酯的相关报道。而制备合格的DEP人工免疫原是生物免疫得到高特异性抗DEP抗体的前提，更是建立DEP免疫检测分析方法的关键，这将具有重要的应用价值和理论研究意义。

发明内容