[发明专利]一种利用低温冷冻环境从抗菌脂肽溶液中除盐的方法

权利要求书

1.一种利用低温冷冻环境从抗菌脂肽溶液中除盐的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）将解淀粉芽孢杆菌发酵制备抗菌脂肽后得到的发酵液经过滤，去除菌体，制得澄清液；

（2）向步骤（1）制得的澄清液中流加稀盐酸至pH值为1.8～2.5，室温静置16小时以上，弃上清液，制得浆状流体；

（3）向步骤（2）制得的浆状流体中加入萃取剂，萃取剂的加入量为步骤（1）中发酵液体积的5%～10%，搅拌均匀，0～20℃萃取3～5小时，离心后，经0.22微米的有机膜微滤，制得滤液；

所述的萃取剂为无水乙醇或植物油；

（4）将步骤（3）制得的滤液在-25～-10℃的条件下放置5～10天进行结晶，经0.22微米的有机膜微滤过滤去除结晶，制得抗菌脂肽溶液。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中的过滤为80～200目滤布的板框过滤。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的板框过滤的滤布为预涂硅藻土的滤布，硅藻土的涂布量为每百升发酵液0.8～1.5kg。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）中还包括对浆状流体进行离心，去除上清留沉淀，得到固形物湿重10～20g/L的步骤。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）中流加稀盐酸为在搅拌条件下进行，稀盐酸的速度为每升澄清液每分钟流加0.4～0.8mol的盐酸。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（3）中的无水乙醇为食品级无水乙醇；植物油为大豆油、花生油、山茶油、棉籽油。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（3）和步骤（4）中的有机膜为聚醚砜有机膜。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中，发酵液采用如下方法制备：

（i）将发酵培养基灭菌后，调节温度至25～28℃，在通气量为1vvm、搅拌速度为200rpm的条件下，标定溶氧的相对百分点；

所述发酵培养基组分如下：

葡萄糖15～25g/L，L-谷氨酸钠5～14g/L，硫酸镁0.5g/L，磷酸二氢钾1g/L，氯化钾0.5g/L，硫酸亚铁0.15mg/L，硫酸锰5mg/L，硫酸铜0.16mg/L；

（ii）将解淀粉芽孢杆菌种子液接种于步骤（i）标定溶氧的相对百分点后的发酵培养基中，在温度25～28℃、通气量为1vvm、搅拌速度为200rpm的条件下进行发酵培养，标定初始pH值，并标记为发酵起始零点；

（iii）当发酵过程中pH值较初始pH值升高大于1.2时，或者当发酵过程中pH值较初始pH值升高大于1且在1小时内pH值升高幅度小于0.2时，结束发酵。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述步骤（ii）中的接种量为体积百分比1%～2%。

10.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述步骤（ii）中的解淀粉芽孢杆菌种子液，制备步骤如下：

a、将解淀粉芽孢杆菌接种于PDA固体培养基中，在温度至25～28℃的条件下，活化1-2天，制得活化后的解淀粉芽孢杆菌；

b、将步骤a制得的活化后的解淀粉芽孢杆菌接种于种子液培养基中，在温度至25～28℃的条件下，培养18～24小时，制得解淀粉芽孢杆菌种子液；

所述种子液培养基组分如下：

葡萄糖20g/L，酵母浸粉5～10g/L，蛋白胨10～20g/L，氯化钠5～10g/L。