[发明专利]一种解淀粉芽孢杆菌及其固态菌剂的制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种解淀粉芽孢杆菌及其固态菌剂的制备方法与应用。

背景技术

近年来，过量滥用化肥农药等化学品所造成的药物残留、土壤污染等问题日益严峻。现代，随着人们保护环境意识的增强及对无公害农产品的日益重视,新技术、新产品研发不断深入,探寻高效、安全、环保微生物菌剂以替代或部分替代化肥和农药的研究日益增加。

芽孢杆菌是一类非常重要的植物根际促生菌资源，具有分泌IAA、改善根际营养状况和细菌活性等各种功能。同时，芽孢杆菌抗逆性强有利于工业化的大规模生产。它已成为国内外热点研究的植物根际促生菌。芽孢杆菌因生存能力强，能产酶类、抗菌脂肽等多种促生因子，正在成为国内外热点研究的植物根际促生菌。

现今，将有益芽孢杆菌制备成微生肥料是植物根际促生菌研究的必然发展方向。微生物肥料主要通过固体发酵和液体发酵两种工艺来制备。相比液体发酵，固体发酵有以下优点：(1)低成本，低能耗；(3)产品稳定易于运输，且具有大规模生产的开发前景。因此，制备芽孢杆菌固态菌剂，明确其在植物促生的效果，对提高作物产量与品质、发展生态农业具有重要意义。

目前，解淀粉芽孢杆菌的固态菌剂未见报道。

发明内容

本发明旨在克服现有技术中的空白，提供一种新的解淀粉芽孢杆菌及其固态菌剂。

本发明的目的第一目的是保护一株解淀粉芽孢杆菌，即解淀粉芽孢杆菌L-S60，其分类命名为解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens。该菌种已于2014年11月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏登记号为CGMCC NO.10045。本发明提供的解淀粉芽孢杆菌L-S60对植物生长具有促进作用。

本发明的第二目的是保护一种解淀粉芽孢杆菌固态菌剂的制备方法，所述解淀粉芽孢杆菌为本发明提供的解淀粉芽孢杆菌L-S60，所述方法包括以下步骤：

(1)取解淀粉芽孢杆菌，进行活化、增殖后，获得有效活菌数为0.1～1.0×10⁹cfu/ml的种子液；

(2)将所述种子液按15～35ml/100g与固体含水培养基混合均匀，将所得的混合物在30～40℃静置培养2～5d，干燥至混合物含水量为10％以下，粉碎过筛，即得。

所述步骤(1)中，活化、增殖所用的培养基优选为LB培养基。

所述步骤(1)优选为：取所述解淀粉芽孢杆菌，在LB固体平板培养基上划线培养，进行菌种活化；取活化后的健壮、典型菌落，接种于5～15ml LB液体培养基中进行增殖，再接种于250～350ml LB液体培养基中进行培养，即可。

所述步骤(1)进一步优选为：取所述解淀粉芽孢杆菌，在LB固体平板培养基上划线，在30～40℃活化24～36h；取活化后的健壮、典型菌落，接种于10ml LB液体培养基中，在30～40℃培养24～36h；再接种于300ml LB液体培养基中，在30～40℃培养24～36h，即可。

具体而言，所述LB固体平板培养基可由以下方法制备而成：取蛋白胨10g、牛肉膏5g、氯化钠5g、琼脂18g、蒸馏水1L，pH7.0，121℃灭菌15min，冷却至50-60℃，无菌条件下倒平板，即可。

所述LB液体培养基可由以下方法制备而成：取蛋白胨10g、牛肉膏5g、氯化钠5g、蒸馏水1L，pH 7.0，121℃灭菌15min，自然冷却，即可。

步骤(2)所述固体含水培养基由包括以下重量份的成分混合而成：花生饼粉25～55份，麦麸20～55份，棉粕11.5～40份，碳酸钠0.1～1.0份，葡萄糖0.1～1.0份，蛋白胨0.1～1.0份；还包括占全部固体物料重量之和30～60％的水。

所述固体含水培养基优选为由包括以下重量份的成分混合而成：花生饼粉25～53份，麦麸31.4～55份，棉粕11.5～17份，碳酸钠0.2～1.0份，葡萄糖0.2～1.0份，蛋白胨0.2～1.0份；还包括占全部固体物料重量之和30～45％的水。

所述固体含水培养基进一步优选为由包括以下重量份的成分混合而成：花生饼粉53份，麦麸35份，棉粕11.5份，碳酸钠0.5份，葡萄糖0.5份，蛋白胨0.5份；还包括占全部固体物料重量之和45％的水。