[发明专利]一种用于乳酸菌耐药性测定的通用培养基及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于细菌耐药性测定的培养基，尤其涉及一种用于乳酸菌耐药性测定的通用培养基。

背景技术

乳酸菌(lactic acid bacteria)是一类可发酵糖主要产生大量乳酸的细菌的通称，主要为乳杆菌属(Lactobacillus)、双歧杆菌属(Bifidobacterium)和链球菌属(Streptococcus)。乳酸菌为益生菌，在食品和医药工业中占据越来越重要的地位，然而，随着抗生素的广泛使用，使乳酸菌对多种类型的抗生素产生不同程度的耐药性(健康人体及保健品中乳酸菌和双歧杆菌的抗药性分析，中国食品学报，2009年，第9卷第6期)，另一方面，由于目前在构建乳酸菌的基因克隆与表达系统大都采用以抗生素抗性基因作为选择标记，存在抗药性基因转移和扩散的可能性，使得乳酸菌的生物安全性问题引起广泛重视。因此，测定乳酸菌的耐药性对于保证其安全性乃至保障人类健康具有重要现实意义。

目前医学领域测定致病菌，对不同抗生素的敏感性，已形成一套完善的实验方法，如美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)，推荐的“抗菌药物敏感性试验执行标准”(Performance standards for antimicrobial susceptibility testing)。我国医学微生物实验室采用这一标准，目的在于通过实验筛选出针对目标致病菌敏感的抗生素种类及最小抑制量，从而用于治疗。然而，对于细菌耐药性试验，由于没有相应的方法标准，通常情况下参考上述标准，其中的药敏纸片琼脂扩散法(K-B法)，就是耐药性试验常采用方法之一。但就乳酸菌而言，由于乳酸菌对营养因子特殊的需求，该标准所推荐的培养基，不能满足对不同菌属的乳酸菌同时测定耐药性的需求。

乳酸菌主要包括乳杆菌属、双歧杆菌属和链球菌属，其中乳杆菌属、双歧杆菌属需在厌氧环境下生长，而链球菌则在需氧环境下生长，除此之外，这三个不同属的细菌，对营养的需求也不同。目前对乳酸杆菌、双歧杆菌和嗜热链球菌，这三种菌属的培养通常使用不同的培养基，如用于乳酸杆菌培养的乳酸杆菌琼脂培养基(GB 5413.14、GB 5413.15、GB 5413.16、GB 5413.17、GB 5413.19)、MRS培养基(GB 4789.35)等；用于双歧杆菌培养的双歧杆菌培养基(GB 4789.34)、改良MRS(添加了抑制乳杆菌属生长的莫匹罗星锂盐，GB 4789.35)；用于嗜热链球菌培养的MC培养基(GB 4789.35)、M17培养基等，换言之，目前的除能同时支持乳酸杆菌和双歧杆菌生长的培养基外，尚没有能够支持包括乳酸杆菌、双歧杆菌和嗜热链球菌三种菌生长的通用培养基。

对乳酸菌的耐药性测定只能使用不同培养基，乳杆菌属、双歧杆菌属耐药性测定以MRS培养基为主，对链球菌属则采用M17培养基或者其他培养基，如此一来，不仅给实验人员带来不便，而且不便于室内和室间结果比较，测定方法难以统一规范，并且检测成本比较高。如果能有一种培养基用于乳酸菌中不同属细菌耐药性测定，不仅提高检测效率，还将为耐药性测定结果的准确性提供了保证。

综上所述，目前使用没有一种培养基适用于三种不同类型乳酸菌耐药性测定，其技术瓶颈在于：如何选择和优化出一组促生长因子，以组合成一种可以满足三种不同类型乳酸菌较好生长的培养基，同时，所添加成分不能对各类试验抗生素产生影响，造成结果偏差。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种用于乳酸菌耐药性测定的通用培养基。已解决现有技术中没有能同时用于乳杆菌属、双歧杆菌属和链球菌属三种菌属的乳酸菌耐药性测试的培养基。

一种用于乳酸菌耐药性测定的通用培养基，其中，每1000mL的培养基包括：蛋白胨7～15g，牛肉浸粉3～7g，酵母粉2～4g，葡萄糖15～25g，抗坏血酸棕榈酸酯0.8～1.2g，维生素B6为2.6mg，半胱氨酸盐酸盐0.5～1g，泊洛沙姆1.0～2.0g，硫酸镁0.1～0.3g，MnSO₄.4H₂O 0.05g，β-甘油磷酸二钠15～25g，琼脂15～20g，余量为水，pH为6.2±0.2。

在一些实施例中，优选为，所述蛋白胨为胰酪胨、大豆胨、细菌蛋白胨或胰酪胨和大豆胨的混合物。

在一些实施例中，优选为，所述维生素B6为吡哆醇、盐酸吡哆醛或吡哆胺。

在一些实施例中，优选为，所述泊洛沙姆为泊洛沙姆188。