[发明专利]一种用于乳酸菌耐药性测定的通用培养基及其应用

权利要求书

1.一种用于乳酸菌耐药性测定的通用培养基，其特征在于，每1000mL的培养基包括：蛋白胨7～15g，牛肉浸粉3～7g，酵母粉2～4g，葡萄糖15～25g，抗坏血酸棕榈酸酯0.8～1.2g，维生素B6为2.6mg，半胱氨酸盐酸盐0.5～1g，泊洛沙姆1.0～2.0g，硫酸镁0.1～0.3g，MnSO₄.4H₂O 0.05g，β-甘油磷酸二钠15～25g，琼脂15～20g，余量为水，pH为6.2±0.2。

2.如权利要求1所述的通用培养基，其特征在于，所述蛋白胨为胰酪胨、大豆胨、细菌蛋白胨或胰酪胨和大豆胨的混合物。

3.如权利要求1所述的通用培养基，其特征在于，所述维生素B6为吡哆醇、盐酸吡哆醛或吡哆胺。

4.如权利要求1所述的通用培养基，其特征在于，所述泊洛沙姆为泊洛沙姆188。

5.如权利要求1所述的通用培养基，其特征在于，所述蛋白胨为胰酪胨5g和大豆胨5g；所述牛肉浸粉为5g，所述酵母粉为3g，所述葡萄糖为20g，所述抗坏血酸棕榈酸酯为1g，所述维生素B6为盐酸吡哆醛，所述半胱氨酸盐酸盐为0.5g，所述泊洛沙姆为1.2g，所述硫酸镁为0.2g，所述β-甘油磷酸二钠为15～19g，所述琼脂为13g。

6.一种用于测定乳酸菌对抗生素耐药性实验的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)平板制备：称取如权利要求1-5中任一项通用培养基的各组分，加入到去离子水中，搅拌，加热至完全溶解，调节pH至6.2±0.2，高压灭菌后，待冷却至45℃～55℃，无菌操作倒平板，备用；

2)受试菌和标准对照菌的活化与培养：受试菌与标准对照菌分别在各自最适温度下活化2～3代，分别以0.5～1.5％接种量接种液体培养基，在最适温度下厌氧或好氧培养12h左右，采用标准比浊溶液测定菌液的OD值，使菌液浓度在1.5×10⁸～3.0×10⁸cfu/mL范围；

3)接种：分别吸取受试菌与标准对照菌0.1mL，接种于所述步骤1制备的培养基上，涂布均匀，放置7～15min，使培养基表面干燥；

4)药敏纸片贴放及培养：将标准药敏纸片贴放所述步骤1制备的固体培养基表面，每皿4片，纸片外沿距平皿外沿15～20mm，纸片间距20mm，然后将平皿倒置在培养箱或充N₂的厌氧罐中，于最适温度下培养18～20h，对生长缓慢者培养48h；

5)结果分析：测量抑菌圈宽度并判断受试菌对抗生素的敏感性测量受试菌与标准对照菌的抑菌圈宽度，判断受试菌抗生素的敏感性结果。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述受试菌包括乳杆菌、双歧杆菌和/或嗜热链球菌。

8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述标准对照菌为金黄色葡萄球菌。

9.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述最适合温度为36℃±1℃。

10.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述判断的标准为：当受试菌的抑菌圈宽度大于或等于标准对照菌的抑菌圈宽度，或者前者小于后者，但两者之差小于3mm判为敏感；当受试菌的抑菌圈宽度大于3mm，但小于标准对照的抑菌圈宽度，且二者之差大于3mm为中度敏感；当抑菌圈的宽度小于或等于3mm，为耐药。