[发明专利]一种基于单引物扩增反应的DNA分子标记方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种基于单引物扩增反应的DNA分子标记方法。

背景技术

DNA分子标记是以个体间核苷酸序列变异为基础的遗传标记，直接在DNA水平上检测生物个体之间的差异，能够从DNA水平直接反映生物的遗传本质，是生物个体DNA水平上遗传变异的直接反映。它具有数量丰富、信息量大、多态性高、检测不受季节、环境和个体发育阶段的影响、检测手段简单迅速等优点，已被广泛应用于遗传多样性分析、亲缘关系评价、指纹图谱构建、遗传连锁图谱构建、QTL或基因定位与克隆和分子标记辅助选择育种等领域。

自1980年首次提出分子标记的概念以来，DNA分子标记的研究不断有文献报道，特别是上世纪90年代以来，发展十分迅速。目前被广泛应用的DNA分子标记技术主要有：DNA限制性片段长度多态性(Restriction Fragment Length Polymorphism,RFLP)、随机扩增多态性DNA(Random Amplified Polymorphic DNA,RAPD)、简单序列重复间多态性(Inter-Simple Sequence Repeats,ISSR)、扩增片段长度多态性(Amplified Fragment Length Polymorphism,AFLP)、简单重复序列(Simple Sequence Repeat,SSR)、特殊序列扩增区(Sequence Characterized Amplified Regions,SCAR)、相关序列扩增多态性(Sequence-Related Amplified Polymorphism,SRAP)、靶位区域扩增多态性(Target Region Amplified Polymorphism,TRAP)、目标起始密码子多态性(Start Codon Targeted Polymorphism，SCoT)和单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphisms,SNP)等(Bostein et al.,1980；Williams et al.,1990；Zietkiewicz et al.,1994；Vos et al.,1995；Tautz and Renz 1984；Paran and Miehelmore 1993；Li and Quiros 2001；Hu and Vick 2003；Collard and Mackill 2009)。按照分类的不同，上述DNA分子标记技术既可以被分为基于分子杂交(如RFLP)和基于PCR技术这两大类分子标记技术，而基于PCR技术上的DNA分子标记技术按照所用引物性质的不同可以分为基于随机引物扩增(如RAPD)的分子标记技术和基于特异引物扩增(如SSR)的分子标记技术，按照所用引物数量的不同可分为基于单引物扩增的分子标记技术和基于双引物扩增的分子标记技术(熊发前等，2010a)；也可以被分为随机DNA分子标记、目的基因分子标记和功能性分子标记(Andersen and Lübberstedt 2003)。