[发明专利]一种基于单引物扩增反应的DNA分子标记方法有效
| 申请号： | 201510269108.5 | 申请日： | 2015-05-22 |
| 公开（公告）号： | CN104946742B | 公开（公告）日： | 2017-12-22 |
| 发明（设计）人： | 熊发前;唐荣华;刘俊仙;韩柱强;贺梁琼;唐秀梅;蒋菁;黄志鹏;钟瑞春;李忠;杨柳;史卫东;陈忠良;邹成林;何海旺;余功明 | 申请（专利权）人： | 广西壮族自治区农业科学院经济作物研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 成都九鼎天元知识产权代理有限公司51214 | 代理人： | 陈科恒 |
| 地址： | 530007 广西*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 引物 扩增 反应 dna 分子 标记 方法 | ||
1.一种基于单引物扩增反应的DNA分子标记方法，其特征在于包括以下步骤：根据真核生物基因组中基因外显子区域富含GC设计并合成单引物，提取样品基因组DNA作为模板，利用设计好的单引物和所提取的样品DNA模板在常规PCR反应体系和PCR反应程序下进行PCR扩增，扩增产物通过琼脂糖凝胶电泳分离，凝胶电泳分离后检测单引物在基因组基因外显子区域中的两个结合位点间的多态性；其中，所述单引物的序列长度为17bp，5’端的6个碱基填充序列为富含AT碱基的限制性内切酶酶切位点序列，中间核心区序列是由8个GC碱基随机排列组成，这14个碱基组成核心序列，最后3’端是3个随机碱基；
所述单引物的序列为下述Mme1～Mme15中的任意一种，引物序列走向为5’端到3’端：
2.根据权利1所述的一种基于单引物扩增反应的DNA分子标记方法，其特征在于所述的PCR反应程序为：94℃预变性4min；然后按94℃变性30s，45℃－55℃退火1min，72℃延伸90s，总共35个循环；最后一步72℃延伸10min，4℃保存备用。
3.根据权利要求1所述的一种基于单引物扩增反应的DNA分子标记方法，其特征在于：所述扩增产物通过琼脂糖凝胶电泳分离，是将PCR扩增产物通过琼脂糖凝胶电泳分离后溴化乙锭染色，在凝胶成像系统下拍照、保存图像和记录结果。
4.一种用于DNA分子标记中的单引物，其特征在于：所述单引物是根据真核生物基因组中基因外显子区域富含GC设计并合成的，所述单引物的序列长度为17bp，5’端的6个碱基填充序列为富含AT碱基的限制性内切酶酶切位点序列，中间核心区序列是由8个GC碱基随机排列组成，这14个碱基组成核心序列，最后3’端是3个随机碱基；
所述单引物的序列为下述Mme1～Mme15中的任意一种，引物序列走向为5’端到3’端：
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