[发明专利]一种利用微卫星标记鉴定青虾家系的引物组及方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种利用微卫星标记鉴定青虾家系的引物组及方法，属于虾类育种和分子标记技术领域。

背景技术

青虾，学名日本沼虾(Macrobrachium nipponense)，俗称河虾，具有繁殖力高，适应性强，食性广，肉味鲜美，可常年上市等优点。当前全国养殖青虾年产量超过23万吨，年产值近200亿元，青虾养殖已在我国水产养殖中发挥了举足轻重的作用。但目前养殖的青虾大多数为未经系统遗传选育的野生种在池塘多代养殖的后代，随着青虾养殖业的高速增长，集约化程度的不断提高，近年来出现了严重的品种退化现象，严重制约了青虾养殖业的发展。要实现青虾养殖的可持续发展，必须从品种着手，对青虾进行遗传改良。在青虾的选育工作中，为避免近亲交配造成后代生活力降低和种质退化等，对青虾的亲子鉴定就显得尤为迫切，但是目前还没有鉴定青虾亲子关系的有效方法，传统区分家系的方法是在眼柄上绑定眼柄标记，不但耗费人力物力，而且绑定不适用于幼虾，在幼虾长到足够大之前仍需要一段时间的分池饲养，因此建立一种青虾亲子关系鉴定的方法具有极其重要的理论和生产意义。

微卫星标记据有多态性高、稳定性强、特异性高、共显性遗传等优点，为水产动物选育中保持家系信息、确认亲缘关系、追踪系谱提供了有用的工具。如果已知父母的基因型，微卫星标记能在没有物理标记且不需要分开养殖的情况下区分出现混养的群体中个体所属的家系。有关研究(Vandeputte et al.2004；Jerry et al.2006；董世瑞等2008；Wang et al.2009)证实了微卫星在水产动物研究中确认父母本和分析家系关系中的应用价值。目前尚未有将微卫星标记应用于青虾家系鉴定的报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种利用微卫星标记鉴定青虾家系的引物组及方法，该方法需要具有鉴别准确率高、不需将各子代分开放养等优点，主要是通过青虾微卫星位点进行PCR扩增和基因分型检测来实现。

技术方案：

根据本发明的一个方面，一种利用微卫星标记鉴定青虾家系的引物组，包括有用于扩增如下12个微卫星位点的引物对：WXM02、WXM04、WXM05、WXM06、WXM07、WXM13、WXM31、WXM33、WXM38、WXM41、E-WXM33和E-WXM62。

所述的引物对的序列如下所示：WXM02，SEQ ID NO.1～2、WXM04，SEQ ID NO.3～4、WXM05，SEQ ID NO.5～6、WXM06，SEQ ID NO.7～8、WXM07，SEQ ID NO.9～10、WXM13，SEQ ID NO.11～12、WXM31，SEQ ID NO.13～14、WXM33，SEQ ID NO.15～16、WXM38，SEQ ID NO.17～18、WXM41，SEQ ID NO.19～20、E-WXM33，SEQ ID NO.21～22和E-WXM62，SEQ ID NO.23～24。

根据本发明的另一个方面，一种利用微卫星标记鉴定青虾家系的方法，包括如下步骤：

第1步、提取青虾样本的DNA；

第2步、使用引物组对青虾样本进行PCR扩增；

第3步、对扩增产物进行电泳分析，利用电泳结果对青虾进行亲子鉴定。

上述的PCR扩增中，采用25μL反应体系，组成如下：其中10mmol/LdNTP 1μL，10×buffer 2.5μL，25mmol/L MgC1₂2μL，8pmol/μL两侧引物各0.75μL，5U TaqDNA聚合酶0.2μL，50ng/μL的DNA模板2μL，用超纯水补足25μL。

PCR反应条件为：94℃预变性5min；94℃变性30s，复性30s，72℃45s，30个循环；最后72℃延伸7min；4℃保存。

上述的第3步中，用10％的非变性聚丙烯酰胺凝胶进行电泳检测、EB染色10～15min，凝胶成像系统成像拍照。

有益效果

1.本发明可将不同家系自带混养在一起，不需要将各家系子代采用水族箱或水泥池分开放养，可极大节省人力、物力和财力；2.本发明将不同家系子代放在一起混养，可避免家系分开放养引入的环境误差，提高选育效果；3.本发明不需要对个体使用物理标记，避免了物理标记存在的操作繁琐、易损伤幼虾、对生长造成一定影响、标记保存时间不长等缺陷；4.

本发明中所选的12对微卫星引物在青虾中PCR扩增反应稳定、扩增片段清楚、多态性高，适用于青虾的亲子鉴定。

具体实施方式

实施例1

(1)青虾家系的繁育