[发明专利]基因单核苷酸多态性位点快速检测试剂盒及其方法

权利要求书

1.基因单核苷酸多态性位点快速检测试剂盒，其特征在于：包括PCR反应混合液，PCR反应混合液原料包括DNA聚合酶、dNTPs、上游引物、下游引物、突变型分子信标、野生型分子信标、MgCl₂、PCR缓冲液和细胞裂解液。

2.如权利要求1所述基因单核苷酸多态性位点快速检测试剂盒，其特征在于：所述的细胞裂解液的原料由十二烷基硫酸钠、聚乙二醇辛基苯基醚组成。

3.如权利要求2所述基因单核苷酸多态性位点快速检测试剂盒，其特征在于：所述的PCR缓冲液为5x Colorless Reaction Buffer。

4.如权利要求3所述基因单核苷酸多态性位点快速检测试剂盒，其特征在于：所述的PCR反应混合液原料的终浓度为：

DNA聚合酶 0.04-0.1U/ul        dNTPs  0.1-0.5mM

上游引物   0.2-0.5 uM

下游引物   0.2-0.5 uM

突变型分子信标  0.2-0.5uM

野生型分子信标  0.2-0.5 uM

5x Colorless Reaction Buffer   0.5-1.5x

MgCl₂    1-2.5 mM

细胞裂解液的原料终浓度为：

十二烷基硫酸钠  0.005-0.015%w/v

聚乙二醇辛基苯基醚  0.001-0.03%w/v。

5.如权利要求4所述基因单核苷酸多态性位点快速检测试剂盒，其特征在于：

所述的PCR反应混合液原料的终浓度为：

DNA聚合酶 0.08U/ul        dNTPs  0.3mM

上游引物   0.4 uM

下游引物   0.4 uM

突变型分子信标  0.4 uM

野生型分子信标  0.3 uM

5x Colorless Reaction Buffer   1x

MgCl₂    2 mM

细胞裂解液的原料终浓度为：  

十二烷基硫酸钠  0.005%w/v

聚乙二醇辛基苯基醚  0.01%w/v。

6.如权利要求4或5所述基因单核苷酸多态性位点快速检测试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒的分装量为10-50ul。

7.基因单核苷酸多态性位点快速检测方法，其特征在于：检测步骤包括：

第一步：取样

A：患者先用温水漱口2-3次，去除口腔内的食物残渣；

B：打开装有检测试剂的试剂盒，取出装有试剂的试剂管；

C：用取样装置伸入患者口腔內颊处前、后或者上、下刮取3-4次，取得样品；

D：将取得的细胞样本放入试剂管中；

待试剂冻融之后，弹试剂管，细胞样品在试剂中混合均匀；

去除气泡；

第二步：反应

将样品处理后的试剂管放入PCR仪器进行反应；

第三步：分析结果

得到扩增曲线和荧光颜色分析结果。

8.如权利要求7所述的基因单核苷酸多态性位点快速检测方法，其特征在于：所述第二步的反应步骤中反应步骤为：

a、95℃预变性5min；

b、95℃变性5s；

c、56℃退火30s；

且a、b、c步骤反应50个循环；

在反应过程中的光学条件为：荧光PCR至少为双通道，且双通道的激发光波长分别为450-500nm和550-600nm之间。

9.如权利要求6或7所述的基因单核苷酸多态性位点快速检测方法，其特征在于：所述的第一步D步骤中的取样装置为牙签。