[发明专利]一种提高氧化葡萄糖酸杆菌同源重组效率的方法有效
| 申请号： | 201510063525.4 | 申请日： | 2015-02-06 |
| 公开（公告）号： | CN104611285B | 公开（公告）日： | 2017-12-29 |
| 发明（设计）人： | 周景文;陈坚;王盼盼;堵国成 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/74;C12N15/90;C12P17/04;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京爱普纳杰专利代理事务所(特殊普通合伙)11419 | 代理人： | 张勇 |
| 地址： | 214122 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 提高 氧化 葡萄糖 杆菌 同源 重组 效率 方法 | ||
1.一种同源重组效率提高的氧化葡萄糖酸杆菌(Gluconobacter oxydans)工程菌，其特征在于，表达了外源Red重组酶；编码所述Red重组酶的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；将携带编码Red重组酶的重组载体pKD46转入氧化葡萄糖酸杆菌(Gluconobacter oxydans)WSH-003，获得所述氧化葡萄糖酸杆菌工程菌。
2.一种构建权利要求1所述氧化葡萄糖酸杆菌(Gluconobacter oxydans)工程菌的方法，其特征在于，是将携带编码Red重组酶的重组载体通过电转化方法导入氧化葡萄糖酸杆菌(Gluconobacter oxydans)WSH-003。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述电转采用1800V电场强度，200Ω电阻和25μF电容，电转后涂布于氨苄青霉素抗性山梨醇培养基平板，筛选重组菌。
4.一种应用权利要求1所述氧化葡萄糖酸杆菌(Gluconobacter oxydans)工程菌进行同源重组的方法，其特征在于，主要包括：(1)分别截取目标基因序列上游800-1000bp和下游800-1000bp作为上游同源臂和下游同源臂，(2)设计引入酶切位点的融合PCR引物，扩增并融合上下游同源臂，(3)标记基因通过酶切连接插入上下游同源臂之间，构建得到重组用的同源片段，(4)将同源片段转化氧化葡萄糖酸杆菌工程菌，利用标记基因筛选得到目标菌株。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述标记基因包括卡那基因(kana)和胞嘧啶脱氨酶基因(codBA)。
6.权利要求1所述氧化葡萄糖酸杆菌(Gluconobacter oxydans)工程菌在构建维生素C一步生产菌中的应用。
7.权利要求1所述氧化葡萄糖酸杆菌(Gluconobacter oxydans)工程菌在氧化葡萄糖酸杆菌基因敲除中的应用。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于江南大学，未经江南大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201510063525.4/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
