[发明专利]从复杂样品中分离微生物的方法在审
| 申请号： | 201480059941.0 | 申请日： | 2014-10-09 |
| 公开（公告）号： | CN105658806A | 公开（公告）日： | 2016-06-08 |
| 发明（设计）人： | M.霍纳德尔;S.茹埃特 | 申请（专利权）人： | 默克专利股份公司 |
| 主分类号： | C12Q1/24 | 分类号： | C12Q1/24;C12Q1/04;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 中国专利代理(香港)有限公司 72001 | 代理人： | 权陆军;万雪松 |
| 地址： | 德国达*** | 国省代码： | 德国;DE |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 复杂 样品 分离 微生物 方法 | ||
1.从包含哺乳动物细胞的样品中分离微生物的方法，其包括
a)使所述样品与包含Benzonase?核酸酶的裂解缓冲液接触，
b)通过移除所述哺乳动物细胞获得所述微生物。
2.从包含哺乳动物细胞的样品中分离和检测微生物的方法，其包括
a)使所述样品与包含Benzonase?核酸酶的裂解缓冲液接触，
b)通过移除所述哺乳动物细胞而获得所述微生物，
c)对所述微生物进行通用裂解，
d)实施特定的或通用的检测方法以检测所述微生物。
3.根据权利要求1或2的方法，其特征在于，所述样品为生物反应器样品。
4.根据权利要求1至3中一项或多项的方法，其特征在于，所述样品中所述哺乳动物细 胞的数量为至少106个细胞。
5.根据权利要求1至4中一项或多项的方法，其特征在于，所述样品的体积为至少5ml。
6.根据权利要求1至5中一项或多项的方法，其特征在于，所述裂解缓冲液包含浓度为 2.5U至175U/样品的Benzonase?核酸酶。
7.根据权利要求1至6中一项或多项的方法，其特征在于，所述哺乳动物细胞选自生长 在悬浮培养中的细胞、生长在微载体上的细胞和/或杂交瘤细胞系。
8.根据权利要求1至7中一项或多项的方法，其特征在于，所述哺乳动物细胞选自CRL- 8018细胞、CF-10H5细胞、CHO细胞、NSO细胞、Sp2/0细胞、HT-1080细胞、MDCK细胞、HeLa细胞 或Vero细胞。
9.根据权利要求1至8中一项或多项的方法，其特征在于，所述微生物为细菌、酵母、真 菌和/或其组合。
10.根据权利要求1至9中一项或多项的方法，其特征在于，在步骤b）中采用了离心。
11.根据权利要求2至10中一项或多项的方法，其特征在于，在步骤c）中采用了超声处 理。
12.根据权利要求2至11中一项或多项的方法，其特征在于，在步骤d）中采用了PCR，优 选实时PCR。
13.裂解缓冲液，其包含下列成分：
-按重量计0.05至0.5%的SDS
-0.5M至4M尿素
-0.5mM至10mMMgCl2
-2.5至175UBenzonase?核酸酶
-PBS1X–PBSX1/8。
14.根据权利要求13的裂解缓冲液在根据权利要求1至12中一项或多项的方法中的用 途。
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