[发明专利]用于制备DNA文库的DNA接头分子以及生产它们的方法和用途

权利要求书

1.一种DNA接头分子，其包含双链分子，其中

a.第一链的5’末端被修饰成使得第一核苷酸不含游离羟基并且在5’位置处没有游离磷酸基团，

b.所述第一链的3’末端被修饰成使得最后一个核苷酸在3’位置处不含游离羟基，

c.反向链的5’末端被修饰成使得第一核苷酸不含游离羟基并且在5’位置处没有游离磷酸基团，

d.所述反向链的3’末端以游离羟基为特点，

其中两条链的5’末端处和第一链的3’末端处的羟基被酯化或醚化。

2.权利要求1的DNA接头分子，其含有条形码序列以及用于扩增引物和测序引物的结合位点。

3.权利要求1的DNA接头分子，其特征在于它具有20至90个碱基对的长度。

4.权利要求1的DNA接头分子，其特征在于它具有40至70个碱基对的长度。

5.权利要求1的DNA接头分子，其特征在于它具有40至60个碱基对的长度。

6.权利要求1至5任一项的DNA接头分子，其特征在于通过附连5’-C3间隔基或5’-D间隔基对所述反向链的5’末端进行修饰。

7.权利要求1至5任一项的DNA接头分子，其特征在于通过附连5’-C3间隔基或5’-O-甲基脱氧核苷酸对所述第一链的5’末端进行修饰。

8.权利要求1至5任一项的DNA接头分子，其特征在于通过3’-C3间隔基或3’-氨基修饰物对所述第一链的3’末端进行修饰。

9.一种用于生产DNA接头分子的方法，所述DNA接头分子包含双链分子，所述方法具有下列步骤：

a.修饰第一链的5’末端，使得没有游离羟基和游离磷酸基团可用，

b.修饰所述第一链的3’末端，使得没有游离羟基可用，

c.修饰反向链的5’末端，使得没有游离羟基和游离磷酸基团可用，

其中两条链的5’末端处和第一链的3’末端处的羟基被酯化或醚化。

10.权利要求9的用于生产DNA接头分子的方法，其中所述第一链的5’末端的修饰通过附连5’-O-甲基脱氧胸苷一磷酸或5’-C3间隔基来实现。

11.权利要求9或10的用于生产DNA接头分子的方法，其中所述第一链的3’末端的修饰通过附连3’-C3间隔基或3’-氨基修饰物来实现。

12.权利要求9或10的用于生产DNA接头分子的方法，其中所述反向链的5’末端的修饰通过附连5’-C3间隔基或5’-D间隔基来实现。

13.一种产生DNA文库的方法，所述方法包括下列步骤：

1)双链DNA的片段化，

2)片段化的双链DNA的末端修复，

3)所述片段化的双链DNA的5’末端的磷酸化，

4)将权利要求1至8任一项的DNA接头分子与片段化的、末端修复且5’磷酸化的双链DNA连接，其中在步骤2之前添加权利要求1至8任一项的DNA接头分子。

14.权利要求13的产生DNA文库的方法，其中所述双链DNA的片段化通过物理或化学或酶学方法或其组合来进行。

15.权利要求13的产生DNA文库的方法，其中所述片段化的双链DNA的末端修复在具有3’→5’核酸外切酶和5’→3’聚合酶活性的DNA聚合酶的帮助下进行。

16.权利要求15的产生DNA文库的方法，其中所述DNA聚合酶为T4-DNA聚合酶。