[发明专利]D-阿洛酮糖3-差向异构酶的改进的变体及其用途

权利要求书

1.一种亲本D-阿洛酮糖3-差向异构酶的变体，其中该变体以下列序列表征：

-SEQ ID No 4的氨基酸序列；或

-具有G211S取代的SEQ ID No 5的氨基酸序列；或

-具有G210S取代的SEQ ID No 6的氨基酸序列；或

-具有G211S取代的SEQ ID No 7的氨基酸序列；或

-具有G213S取代的SEQ ID No 8的氨基酸序列；或

-具有G223S取代的SEQ ID No 9的氨基酸序列；或

-具有G213S取代的SEQ ID No 10的氨基酸序列，

并且其中所述变体具有D-阿洛酮糖3-差向异构酶活性。

2.根据权利要求1所述的变体，其中该变体具有一个或若干个以下特征：

a.与该亲本D-阿洛酮糖3-差向异构酶相比，具有更低的pH最佳值；和/或

b.与该亲本-阿洛酮糖3-差向异构酶相比，具有对底物D-果糖的更高催化效率；和/或

c.与该亲本-阿洛酮糖3-差向异构酶相比，在60℃具有更长的半衰期。

3.根据权利要求2所述的变体，其中所述更低的pH最佳值在6至7的范围内。

4.根据权利要求2所述的变体，其中与该亲本-阿洛酮糖3-差向异构酶相比，对底物D-果糖的催化效率高至少两倍。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的变体，其中该亲本D-阿洛酮糖3-差向异构酶是选自：来自菊苣假单胞菌(Pseudomonas cichorii)的D-塔格糖3-差向异构酶、来自根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)的D-阿洛酮糖3-差向异构酶、来自梭菌属(Clostridium sp)的D-阿洛酮糖3-差向异构酶、来自闪烁梭菌(Clostridium scindens)的D-阿洛酮糖3-差向异构酶、来自鲍氏梭菌(Clostridium bolteae)的D-阿洛酮糖3-差向异构酶、来自瘤胃球菌属(Ruminococcus sp)的D-阿洛酮糖3-差向异构酶、和来自解纤维梭菌(Clostridium cellulolyticum)的D-阿洛酮糖3-差向异构酶。

6.根据权利要求5所述的变体，其中该亲本D-阿洛酮糖3-差向异构酶是来自解纤维梭菌的D-阿洛酮糖3-差向异构酶。

7.一种编码根据权利要求1-6中任一项所述的变体的分离的核酸。

8.一种包含根据权利要求7所述的核酸的重组表达载体。

9.一种包含根据权利要求7所述的核酸或根据权利要求8所述的重组表达载体的重组宿主细胞。

10.根据权利要求9所述的重组宿主细胞，其中将编码所述变体的核酸整合进该宿主细胞的染色体中。

11.根据权利要求9-10中任一项所述的重组宿主细胞，其中该宿主细胞是GRAS菌株。

12.根据权利要求11所述的重组宿主细胞，其中所述宿主细胞是枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。

13.根据权利要求12所述的重组宿主细胞，其中该宿主细胞是枯草芽孢杆菌菌株，其中编码杆菌肽酶F的基因是失活的。

14.一种用于产生D-阿洛酮糖3-差向异构酶变体的方法，该方法包括培养根据权利要求9-13中任一项所述的重组宿主细胞，并且任选地从所得培养物回收产生的D-阿洛酮糖3-差向异构酶变体。