[发明专利]使用免疫玫瑰花结和磁性粒子分离细胞的方法

权利要求书

1.一种用于将包含靶细胞、次级靶标以及非靶细胞的样品中的靶细胞与非靶细胞分离的选择方法，所述方法包括：

a)在允许所述靶细胞与所述次级靶标的免疫玫瑰花结形成的条件下，使所述样品与第一抗体组合物接触，所述第一抗体组合物包含(a)至少一种结合于所述靶细胞的抗体，所述至少一种结合于所述靶细胞的抗体直接或间接键联至(b)至少一种结合于所述次级靶标的抗体；

b)在允许粒子结合于所述免疫玫瑰花结和/或所述次级靶标以形成免疫玫瑰花结-粒子复合物和/或次级靶标-粒子复合物的条件下，使所述免疫玫瑰花结与不是所述次级靶标的粒子和第二抗体组合物接触，所述第二抗体组合物包含：

(i)(a)至少一种结合于单独的或位于所述免疫玫瑰花结内的所述次级靶标的抗体的复合物，所述至少一种结合于所述次级靶标的抗体直接或间接键联至(b)至少一种结合于所述粒子的抗体，或者

(ii)(a)至少一种结合于单独的或位于所述免疫玫瑰花结内的所述次级靶标的抗体的复合物，所述至少一种结合于所述次级靶标的抗体直接或间接键联至(b)至少一种结合于相同的次级靶标的抗体，所述复合物使用常规技术直接地结合于所述粒子，或者

(iii)(a)至少一种结合于单独的或位于所述免疫玫瑰花结内的所述次级靶标的抗体，使用常规技术使所述至少一种结合于所述次级靶标的抗体直接结合至所述粒子，以及

c)从所述样品中分离所述免疫玫瑰花结-粒子复合物和/或所述次级靶标-粒子复合物以将所述靶细胞与所述非靶细胞分离，

其中所述粒子是磁性粒子。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述第二抗体组合物在与所述样品接触之前结合于所述粒子。

3.根据权利要求1-2中任一项所述的方法，其中结合于所述粒子的所述第二抗体组合物在使所述样品与所述第一抗体组合物接触之前添加至所述样品中。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述次级靶标是红细胞。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述次级靶标是粒细胞。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述次级靶标是珠粒。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述珠粒涂有聚合物。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述次级靶标在分离之前添加至所述样品中。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述选择方法是用于选择所需细胞的正选择方法，并且所述靶细胞是所述所需细胞。

10.根据权利要求1所述的方法，其中所述选择方法是用于从所述样品中去除非所需细胞的负选择方法，并且所述靶细胞是所述非所需细胞。

11.根据权利要求1所述的方法，其中所述次级靶标的密度类似于细胞，而所述粒子的密度不同于细胞。

12.根据权利要求1所述的方法，其中所述免疫玫瑰花结-粒子复合物和/或所述次级靶标-粒子复合物是在步骤c)中通过将所述样品放置于强度足以将所述免疫玫瑰花结-粒子复合物和/或所述次级靶标-粒子复合物从所述样品中分离的磁场梯度中而从所述样品中分离。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述方法进一步包括：

d)将所述靶细胞从所述免疫玫瑰花结-粒子复合物中分离。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述靶细胞是通过物理、化学、或酶离解从所述免疫玫瑰花结-粒子复合物中分离。

15.根据权利要求4所述的方法，其中所述方法进一步包括：

d)所述免疫玫瑰花结中所述红细胞的溶解，以及

e)所述靶细胞与所溶解的红细胞和所述粒子的分离。