[发明专利]猪繁殖与呼吸综合征嵌合病毒RvHBJX及其应用

说明书

本发明提供了一种猪繁殖与呼吸综合征嵌合病毒RvHBJX及其应用，属于病毒基因工程技术领域。本发明的猪繁殖与呼吸综合征嵌合病毒RvHBJX是以低致病性PRRSV毒株HB‑1/3.9为骨架包含高致病性PRRSV毒株JXwn06结构蛋白编码区的嵌合病毒，该嵌合病毒经MARC‑145细胞体外连续传代80次，该病毒遗传性质表现稳定；病毒对宿主细胞的适应性随传代次数的增加逐渐增强；嵌合病毒传代60次(P60)及以上对本体动物具有较好的安全性，且接种后能够对高致病性PRRSV毒株感染提供100％的免疫保护，可作为猪繁殖与呼吸综合征的疫苗侯选株，用于预防猪繁殖与呼吸综合征，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明涉及病毒基因工程技术领域，具体地，涉及一种猪繁殖与呼吸综合征嵌合病毒RvHBJX及其应用。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种高度传染性疾病，主要以怀孕母猪发生流产、早产、产死胎和木乃伊胎等繁殖障碍疾病以及仔猪和生长育肥猪出现呼吸道症状为特征(Rossow et al.,1994)。2006年初夏以来，严重型PRRS暴发，并迅速席卷我国主要养猪地区，造成大批生猪死亡，给我国养猪业造成巨大经济损失。疫苗被认为是防控与净化PRRSV的重要工具。但是，PRRSV感染能引起免疫抑制与持续性感染，减毒活疫苗的长期使用存在毒力返强等潜在风险(Madsen et al.,1998)。感染性克隆技术为新型疫苗的研究提供了技术保障。自从第一株PRRSV的感染性克隆成功构建以来(Meulenberg et al.,1998)，反向遗传操作技术已用于分析和研究PRRSV的基因结构与功能、病毒RNA合成的调控机制、致病机制，以及新型疫苗的研究。

一般说来，用同源性高的毒株进行免疫能获得较好的抵抗力。因此将流行毒株的某些基因置换到传统疫苗中，也许能提高疫苗的免疫效力。Ellingson等人利用MLV疫苗毒、MN184毒株为亲本病毒构建了5个嵌合病毒，其中两个是MLV疫苗毒、MN184毒株5’UTR/ORF1相互置换的病毒，一个是以MLV为骨架置换了MN184ORF5-6的嵌合病毒，一个是以MLV为骨架置换了MN184ORF7-3’UTR的嵌合病毒，一个是以MLV为骨架置换了MN184毒株3’UTR的嵌合病毒。这些嵌合病毒免疫后的攻毒实验显示MLV疫苗毒、MN184毒株5’UTR/ORF1相互置换的病毒及以MLV为骨架置换了MN184ORF5-6的嵌合病毒能够诱导产生与传统细胞培养疫苗相似的抵抗力。Lee等人用韩国PRRSV流行毒株的结构蛋白编码区置换了感染性cDNA克隆质粒中的相应区域并拯救出相应的PRRSV嵌合病毒，该病毒能够被自然感染猪的血清所中和，相应的体内试验尚未开展。以上结果说明通过嵌合病毒来研制新型疫苗是可行的。

我国先前的分离毒株PRRSV HB-1(sh)/2002(GenBank收录号AY150312)(Gao etal.,2004)，在全基因组序列上与高致病性毒株的同源性最高(97.2％)，但致病性低。该毒株经MARC-145细胞连续传代，获得能在MARC-145细胞中良好增殖的克隆毒株HB-1/3.9(GenBank收录号EU360130)(冉智光等，2006)，与高致病性毒株的全基因组序列同源性为97.4％。这两个毒株基因组高度同源而生物学特性，如毒力、致病性、生长特性、免疫原性等差异较大。

发明内容

本发明的目的在于提供一种猪繁殖与呼吸综合征嵌合病毒；本发明的另一目的在于提供该嵌合病毒作为嵌合疫苗候选株的用途。

本发明首先提供了一种猪繁殖与呼吸综合征嵌合病毒，命名为RvHBJX，是以低致病性PRRSV毒株HB-1/3.9为骨架，含有高致病性PRRSV毒株JXwn06结构蛋白编码区的嵌合病毒。

其中，高致病性PRRSV毒株JXwn06结构蛋白编码区的基因序列如SEQ ID NO.1所示。