[发明专利]适用于检测转基因抗虫棉花的质粒标准分子及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及转基因植物领域，具体的，本发明涉及适用于检测转基因抗虫棉花的质粒标准分子及其用途，更具体的，本发明涉及一种质粒标准分子、质粒标准分子在检测农作物中的CPTI外源基因和Bt外源基因中的用途、质粒标准分子的制备方法、一种试剂盒以及试剂盒在PCR检测转Bt和CPTI双价抗虫基因棉花中的用途。

背景技术

棉花是我国重要的经济作物，在全球经济中起着中流砥柱作用。中国在1997年就已经开始有转基因植物获得安全证书，到目前为止已有8种植物获批，抗虫棉花是最早获批的其中之一。

BT基因即是苏云金芽胞杆菌(Bacillusthuringiensis，简称Bt)基因，因其杀虫效果好、安全、高效等优点而成为应用最为广泛的杀虫微生物。美国孟山都公司把Bt基因插入棉花植株获得了转基因棉花植株，经与农业研究局和一些大学科学家连续两年的田间试验，防治虫害效果良好。我国“抗虫棉”研究在“七五”期间开始进行，“八五”期间，在“863”计划资助下，人工合成的CryIA(b)和CryIA(c)杀虫基因导入我国棉花主栽品种获得成功，成为继美国之后，第二个拥有自主研制抗虫棉的国家。

转基因产品的安全性一直备受关注，因此转基因产品的定量、定性检测尤为重要，转基因标准物质的使用是转基因产品检测结果的有效和可比的的重要保证，质粒标准分子是转基因标准物质中的一种。

发明内容

依据本发明的一方面，本发明提供一种质粒标准分子，所述质粒标准分子包括CryIA基因，CPTI基因，polyA序列，35S启动子序列和NOS终止子序列。所述质粒标准分子能够用于检测转基因作物中的CryIA外源基因和/或CPTI外源基因。在本发明的一个实施例中，所述质粒标准分子的结构示意图如图1，包括依次连接的35S启动子序列，CryIA基因，polyA序列，NOS终止子序列，35S启动子序列，CPTI基因和NOS终止子序列。任选的，还包含LacZ基因，以在含有IPTG，X-gal的平板培养基上，能够进行蓝白斑筛选。本发明一方面或者任一具体实施方式中质粒标准分子，能够用于快速、简便和准确地检测转基因农作物特别是转双价抗虫基因棉花。

依据本发明的另一方面，本发明提供了上述质粒标准分子在检测农作物中的CPTI外源基因和以下至少之一的Bt外源基因中的用途：CryIAa，CryIAb，CryIAc和CryIAab/ac。在本发明的一个实施例中，所述农作物为转Bt和/或CPTI抗虫基因棉花。

依据本发明的再一方面，本发明提供一种上述质粒标准分子的制备方法，所述方法包括：(1)获取Bt-CpTI基因表达质粒；(2)酶切所述表达质粒，获得Bt-CpTI基因片段；(3)将所述Bt-CpTI基因片段连接到克隆载体上，获得所述质粒标准分子。在本发明的一个实施例中，所述表达质粒的结构示意图如图2所示，包括依次连接的35S启动子序列，CryIA基因，polyA序列，NOS终止子序列，35S启动子序列，CPTI基因和NOS终止子序列。所说的Bt-CpTI基因片段为或者包括，依次连接的35S启动子序列、CryIA基因、polyA序列、NOS终止子序列、35S启动子序列、CPTI基因和NOS终止子序列。在本发明的一个实施例中，表达质粒中的Bt-CpTI基因片段的两端分别含有ECOR1和HindIII酶切位点，所以所述酶切为ECOR1和HindIII双酶切。所说的克隆载体为常规的克隆载体，例如可以为pEASY-T3。利用本发明这一方面的质粒标准分子制备方法，能够简单快速的制备出所说的质粒标准分子。

依据本发明的又一方面，本发明提供一种试剂盒，所述试剂盒包括本发明一方面或者上述任一具体实施方式中的质粒标准分子。在本发明的一个实施例中，所述试剂盒还包括SEQIDNO：1和SEQIDNO：2，SEQIDNO：3和SEQIDNO：4。其中，SEQIDNO：1和SEQIDNO：2能够与各种类型的Bt基因进行特异性识别，用于各种类型Bt基因序列的扩增，SEQIDNO：3和SEQIDNO：4能够分别与CPTI基因上的不同位置特异性结合，用作特异性扩增CPTI基因的引物。

依据本发明的一方面，本发明还提供上述试剂盒在PCR检测转抗虫Bt和CPTI基因棉花中的用途。上述对本发明一方面的质粒标准分子的优点和技术特征的描述，也同样适用本发明这一方面的试剂盒和/或试剂盒的用途，在此不再赘述。