[发明专利]肝癌生物标记物及其用途

说明书

技术领域

本发明属于生物技术和医学领域，涉及一组肝细胞癌的生物标记物——microRNAs(miR-182-5p，miR-363-3p，miR-378a-3p)，及其在辅助个体肝癌筛查、临床诊断与预后判断的应用。

背景技术

在我国，原发性肝癌是最常见的恶性肿瘤之一，超过85％的原发性肝癌都是由于乙型或丙型肝炎病毒感染，长期酗酒和黄曲霉毒素B1摄入引起的。由于临床缺乏有效的预防、检测及治疗手段，大多数患者发现时已属癌症中晚期，且预后较差，死亡率高。据最新统计全球每年新增约75万肝癌患者，而每年也约有70万人死于肝癌，患者死亡率在所有恶性肿瘤中居第三位。在临床检查中，AFP(Alpha-Fetoprotein)作为常用的肝癌诊断的血清学标记物，但其敏感性和特异性差强人意，仅70％左右的肝癌患者血清内的AFP有明显增高，对于直径小于3cm的肿瘤其敏感性仅为25％，而对于直径大于3cm的肿瘤其敏感性也只有50％。因此，寻找一种新的更可靠的生物学标记物用于肝癌诊断和预后判断，具有广泛的科研价值和临床应用前景。

MicroRNA(miRNA)是一类进化高度保守的，由20-23个核苷酸组成的非编码RNA，miRNA的种子区通过靶向结合mRNA的3’-UTR区来调节靶基因的表达。人类约30％的蛋白表达受到miRNA的调控，许多研究表明miRNA扮演着癌基因或抑癌基因的角色，能够同时调节多个基因，通过结合靶mRNA参与调控肿瘤生成过程。目前，不断累积的研究成果已充分证实miRNA在肿瘤发生与发展过程中呈现出不同的表达水平，具有筛查和诊断肝细胞癌并对治疗方案的选择和预后分析具有潜在的指示作用。

生物标记物是指能将机体的生理和病理状态区分开来的生物分子。筛选到可用于肿瘤早期发现、早期诊断的生物标记物可大大提高肿瘤患者的临床治疗效果。最新数据显示肿瘤组织普遍具有特征性的miRNA表达谱，即指肿瘤细胞某几种miRNA的表达水平常与同一组织中的正常细胞存在显著差异，而特征性的miRNA异常表达可望成为用于肿瘤的诊断、病理分级、临床分期、疗效与预后的生物标记物，显示了良好的临床应用前景。

近年来研究人员发现在血浆和血清中也存在独立于细胞之外并且即使在严酷环境下也能明显保持稳定的miRNA分子，而作为生物检测样本，血清具有取材方便、无创伤性、并可连续的体外检测的优点，使得基于miRNA定性和定量检测技术寻找癌症特异性的血清miRNA作为分子标记的方法比传统的蛋白分子标记方法将更加有效，进而可以克服分子标记在抗体制备和定量分析上发展所遇到的瓶颈。因此，开发一种可辅助肝癌筛查和诊断的血清miRNA作为生物标记物，具有广泛的科研价值和临床应用前景。

聚合酶链式反应(Q-PCR)不仅是一种高敏感、高特异的检测核酸分子的定性方法，也是一个能对核酸分子进行精确定量的有力工具。实时荧光定量逆转录聚合酶链反应技术(RT-qPCR)是一种具有革命性意义的定量PCR技术，将之用于肝癌血清样本中miRNAs的定量研究，具有较高的敏感性和特异性。因此本研究通过使用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应技术对肝癌患者血清与健康人群血清样本中miRNAs进行表达量验证，结果证实了miR-182-5p，miR-363-3p，miR-378a-3p这三条miRNAs在肝癌样本与正常样本中存在差异(P＜0.01)。miR-182-5p，miR-363-3p，miR-378a-3p均在肝癌血清中明显高表达，提示其可能参与调控了肿瘤的发生作用。若能筛选与肝癌病理状态有关的特异或异常表达的miRNA作为疾病检测的生物标记物，并研制相应的检测试剂盒，将会大大提升肝癌的检测水平。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种肝癌中可用于稳定、高效率检测肿瘤的生物标记物miR-182-5p，miR-363-3p，miR-378a-3p及其用途。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种有利于肝癌诊断的生物标记物miR-182-5p，miR-363-3p，miR-378a-3p，其特征序列如下：

miR-182-5p：UUUGGCAAUG GUAGAACUCA CACU；

miR-363-3p：AAUUGCACGG UAUCCAUCUG UA；

miR-378a-3p：ACUGGACUUG GAGUCAGAAG GC。

本发明还同时提供了上述生物标记物的用途：制备用于筛查肝癌或辅助肝脏肿瘤病理鉴定和临床诊断的试剂盒。